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[目的]探寻circRNA/miRNA/mRNA调控网络对内皮祖细胞及深静脉血栓形成的影响。为预测DVT的发生、监测DVT进程、评估病情、治疗及预后提供新的理论依据和靶点。[方法]1.外周血采样:根据纳入及排除标准,结合双下肢彩色多普勒血管超声诊断,收集了 2020年8月至2020年12月于昆明医科大学第一附属医院骨科住院的13例DVT患者作为DVT组（实验组）;16例无DVT的健康者作为对照组。2.筛选circRNA、miRNA、mRNA:随机选取DVT组3例研究对象,正常对照组3例研究对象,采取外周静脉血,提取两组外周血样本中的总RNA,去除核糖体及线性RNA后,进行RNA测序,构建circRNA/miRNA/mRNA调控网络图,从中筛选出4组与血管新生有关的基因。3.外周血中内皮祖细胞含量检测:随机收集DVT患者及正常对照组的外周血样本各10例,分离单个核细胞,采用CD31、CD34进行双染标记,流式检测CD31、CD34的比例。另提取血液样本的RNA,行qRT-PCR检测circRNA、miRNA、mRNA的表达量。并对筛选出的4组ceRNA网络基因行qRT-PCR检测验证,测试两组中EPCs的miRNA、circRNA和mRNA的表达水平,验证RNA测序结果。从四组中筛选出差异表达最明显的一组作为后续实验基因。4.建立Balb/c小鼠动物模型、取材及验证:（1）下腔静脉狭窄法建立Balb/c小鼠DVT模型,实验分为三组（对照组、假手术组、模型组各6例）;（2）取材:①取外周血及下腔静脉提取RNA进行qRT-PCR检测候选miR-218-5p、circRNA＿100149、ZNFX1的表达量;②血栓大体标本的称重、测量;③取下腔静脉组织进行HE染色和Carstairs’染色观察血栓形成状态及免疫双荧光检测CD31、CD34的表达验证DVT小鼠下腔静脉中是否含有EPCs。5.外周血中EPCs的原代培养及流式鉴定:随机收集正常组3例空腹外周血行密度梯度离心法分离单个核细胞并在M199培养基进行原代培养后进行取部分细胞以CD34、CD31在流式细胞仪下检测细胞荧光表达情况验证外周血中富含EPCs。鉴定成功后,将此部分剩余的部分外周血再进行后续实验。6.circRNA＿100149对EPCs侵袭、迁移、血管生成能力的影响:通过分组实验对EPCs正常培养、加入正常量的circRNA＿100149、过表达circRNA＿100149、沉默circRNA＿100149分别进行:①细胞划痕实验,通过拍照观察划痕间边界距离的变化,检测其对EPCs迁移能力;②Transwell侵袭实验,通过Transwell膜的EPCs数量,在100倍镜下观察拍照,检测其对EPCs的侵袭能力;③血管形成实验,在倒置显微镜下观察管腔生成情况,检测其对EPCs成血管能力。④四个实验分组中的EPCs经原代培养后提取RNA,通过改变circRNA的量行qRT-PCR检测采用2-ΔΔCt法分析circRNA＿100149、miR-218-5p、ZNFX1的基因的表达量。7.circRNA＿100149/miR-218-5p/ZNFX1 相互作用的验证:（1）将 miR-218-5p mimic与si-mRNA分别与circRNA＿100149共转染到EPCs中,通过加入过表达的circRNA＿100149,来观察加入miR-218-5p mimic是否可以逆转circRNA＿100149对EPCs的功能及证明miR-218-5p与ZNFX1的关系（大致步骤同上）。（2）使用 miRNA mimic、miR-control（miR 阴性对照）、将 miR-218-5p与靶基因结合位点的野生型或突变型ZNFX1 3’-非翻译区序列,并将其插入到pMIR-REPORT荧光素酶载体的Spe Ⅰ和HindⅢ位点。miR-218-5p模拟物或阴性对照与HEK293T细胞共转染。转染后使用双重荧光素酶报告基因测定法进行荧光素酶测定,根据荧光信号的强弱判断靶基因是否为miRNA的靶基因。[结 果]1.通过GEO数据筛选出目的基因组为circRNA＿100149/miR-218-5p/ZNFX1,通过qRT-PCR实验结果显示,DVT组样本中circRNA＿100149相对表达水平降低、miR-218-5p相对表达水平升高、ZNFX1相对表达水平降低。2.下腔静脉狭窄法成功构建Balb/c小鼠DVT模型,在小鼠DVT模型外周血中以上三者的表达量与临床DVT患者的一致,且小鼠DVT模型的下腔静脉组织中富含EPCs。3.健康人的外周血中富含EPCs,当发生DVT时,外周血中的EPCs能快速募集到血栓形成部位,加快血栓的溶解及吸收,而circRNA＿100149能够显著促进EPCs的迁移、侵袭及成血管能力。4.circRNA＿100149过表达时,可通过抑制miR-218-5p的表达从而促进对EPCs的迁移、侵袭及成血管能力。5.ZNFX1是调控深静脉血栓形成中miR-218-5p的靶基因。[结论]1.27个circRNA、20个miRNA和18个mRNA构建的circRNA/miRNA/mRNA调控网络与人体DVT相关。2.DVT 患者外周血中的 circRNA＿100149↓、miR-218-5p↑、ZNFX1↓。3.circRNA＿100149可以作为miR-218-5p的反应海绵调控ZNFX1来促进EPCs的侵袭、迁移及成血管能力,从而促进深静脉血栓的溶解和再通。