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目的:本研究采用99mTc标记的环形CDCRGDCKC多肽(99mTc-RGD-4CK)作为显像剂,对抗血管生成药(恩度)治疗过的H22肝癌小鼠进行显像及体内分布研究,探讨恩度与99mTc-RGD-4CK之间是否存在竞争关系及显像剂(99mTc-RGD-4CK)在监测恩度对H22肝癌疗效方面的价值。方法:第一部分:检测恩度是否抑制肿瘤组织对显像剂(99mTc-RGD-4CK)的摄取选取12只生长良好,肿瘤大小无明显差异的荷瘤KM小鼠,随机分为三个实验组(a、b、c)和一个对照组(d),每组3只,实验组分别于尾静脉注射高、中、低浓度的恩度及固定剂量的显像剂;对照组注射相同体积的生理盐水及显像剂。两小时后,行SPECT显像,利用感兴趣区技术(ROI),测量肿瘤组织(T)与对侧肢体肌肉组织(NT)的放射性计数,计算T/NT值;显像完毕后眼球取血,脱颈处死,取肿瘤组织,称重并测量放射性计数,计算每克组织的百分注入活度(%ID/g)。然后对每组肿瘤组织的T/NT值及%ID/g值进行统计学分析。第二部分:监测疗效选取36只生长良好,肿瘤大小无明显差异的荷瘤KM小鼠,按随机数字表法平均分为4组(A、B、C、D),每组9只,分别于腹腔注射高、中、低浓度的恩度及相同体积的生理盐水,每天用药一次。再将各组随机分为三组,分别给予三天、五天、七天的上述药物治疗后进行疗效的监测。1 SPECT显像:各组荷瘤小鼠尾静脉注射显像剂18.5MBq(500uCi)/0.2ml后两小时进行显像,利用感兴趣区(ROI)技术,测量肿瘤部位(T)与对侧肢体肌肉部位(NT)的放射性计数,计算(T/NT)值,并对各组的T/NT值进行统计学分析。2生物分布的研究:显像完毕后眼球取血,脱颈处死,完整取下肿瘤组织,测量其最大径(L)及最短径(W)计算体积V=LW2/2。然后取心、肝、肺、脾、胃、小肠、肾及肿瘤对侧肢体肌肉和骨,称重并测量放射性计数,计算各个脏器及肿瘤的每克组织百分注入活度(%ID/g),进行统计学分析,并与SPECT显像所得的T/NT值进行相关性分析。3免疫组织化学的研究:取适量肿瘤组织,以10%的福尔马林固定,常规石蜡切片,CD34免疫组化染色,BCIP/NBT显色,判断微血管密度(MVD),对各组微血管密度进行统计学分析,并与肿瘤的%ID/g值进行相关性分析。结果:第一部分:检测恩度是否抑制肿瘤组织对显像剂摄取的研究中,a、b、c、d四组肿瘤组织的%ID/g值及T/NT值分别进行统计分析,结果显示差异无统计学意义(P>0.05),这表明恩度与显像剂之间无竞争作用,且其注射剂量不影响肿瘤组织对显像剂的摄取。第二部分:监测恩度对H22肝癌疗效的研究1第一次疗效监测1.1 SPECT显像的结果治疗三天,各组肿瘤与肌肉组织的放射性比值(T/NT),中剂量组最小(2.92±0.30),生理盐水组最大(3.26±0.37)。方差分析显示四组之间差异无统计学意义(P=0.3191>0.05)。1.2肿瘤的体积治疗三天,各组肿瘤组织的体积(cm3),中剂量组最大(0.94±0.37),低剂量组最小(0.49±0.6),方差分析结果显示四组之间差异无统计学意义(P=0.1163>0.05)。1.3生物分布的结果治疗三天,各组肿瘤组织的每克组织百分注入活度分别为(%ID/g):5.12±0.35、5.29±0.36、5.59±0.25、5.70±0.26,经统计学分析四组之间的差异无统计学意义(P=0.1582>0.05)。1.4免疫组化的结果治疗三天,各组肿瘤组织的微血管密度(MVD)值分别为(个/视野):14.6±2.07,16.2±1.92,17.2±2.59,18.0±3.87经统计学分析各组间差异无统计学意义(P=0.27>0.05)。2第二次疗效监测2.1 SPECT显像的结果治疗五天,各组肿瘤组织的T/NT值经单因素方差分析,差异无统计学意义(P=0.4836>0.05)。2.2肿瘤体积的结果治疗五天,各组的肿瘤体积经单因素方差分析,差异无统计学意义(P=0.88>0.05)。2.3生物分布的结果治疗五天,各组肿瘤组织的%ID/g值分别为(%ID/g):4.02±0.08、5.54±0.27、5.37±0.25、5.63±0.35,经单因素方差分析高剂量组与其余三组之间差异有统计学意义(P=0.0002<0.05)。中剂量组、低剂量组与对照组之间差异无统计学意义。2.4免疫组化的结果治疗五天,各组中肿瘤组织的MVD值(个/视野),高剂量组最低(11.2±1.5),对照组最高(19.4±2.7),中、低剂量组居中(13.4±2.3,15.8±1.6),经单因素方差分析四组间差异有统计学差异(P<0.0001),其中三个治疗组与对照组之间的差异有统计学意义,高剂量组与低剂量组差异也有统计学意义。3第三次疗效监测3.1 SPECT显像的结果治疗七天,各组肿瘤组织的T/NT值经单因素方差分析差异无统计学意义(P=0.2291>0.05)。3.2肿瘤体积的结果治疗七天,各组的肿瘤体积经单因素方差分析差异无统计学意义(P=0.8039>0.05)。3.3生物分布的结果治疗七天,各组肿瘤每克组织的百分注入活度(%ID/g)高剂量组最小(3.69±0.26),其次为中剂量组(3.91±0.44),对照组最大(5.4±0.10)。经单因素方差分析四组间差异有统计学意义(P=0.0007<0.05),其中高、中剂量组与对照组之间差异有统计学意义,而低剂量组与对照组之间差异无统计学意义。3.4免疫组化的结果治疗七天,各组的MVD值分别为(个/视野):9.4±2.6,11.4±2.7,13.2±1.48,19.6±3.36。经单因素方差分析,四组间差异有统计学意义(P<0.0001),其中三个治疗组与对照组之间差异有统计学意义,三治疗组之间差异无统计学意义。4相关性研究4.1肿瘤组织的MVD值与%ID/g值进行相关性研究,两者呈正相关(r=0.8501,P=0.0005<0.05)。4.2肿瘤组织的MVD值与SPECT显像的肿瘤组织T/NT值进行相关性研究,两者呈正相关(r=0.8039,P=0.0016<0.05)。4.3用生物分布得出的肿瘤组织的%ID/g值与肌肉组织的%ID/g值作比得到的肿瘤T/NT值与SPECT显像得出的T/NT值进行相关分析研究,结果两者无相关性(r=0.5384,P=0.0709>0.05)。结论:1实验第一部分恩度在一定剂量(<0.84mg)范围内与显像剂(99mTc-RGD-4CK)之间没有竞争关系。2实验第二部2.1生物分布测量肿瘤对显像剂(99mTc-RGD-4CK)的摄取可以用来评价恩度对肿瘤血管的抑制作用,肿瘤组织对显像剂(99mTc-RGD-4CK)的摄取量与肿瘤组织微血管的密度呈正相关。2.2平面显像测量的肿瘤组织T/NT值误差较大,不能准确的反映肿瘤组织对显像剂的摄取。2.3对肿瘤体积的测量不能用于评价恩度早期的疗效。