微孢子虫是一大类分布广泛的单细胞寄生虫,可以感染包括人类在内的几乎所有无脊椎动物和脊椎动物。家蚕微粒子虫是最早鉴定的微孢子虫,可引起家蚕微粒子病造成养蚕业的巨大经济损失。因此,研究家蚕微粒子虫的致病因子及其在生命周期中的作用对于抑制微粒子虫的感染具有重要意义。类枯草杆菌蛋白酶广泛存在于从细菌到哺乳动物的所有生命形式中。研究表明,类枯草杆菌蛋白酶在家蚕微粒子虫感染和宿主-寄生虫互作中起着关键作用。前期研究已在家蚕微粒子虫中鉴定出两个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因Nbslp1和Nbslp2,但它们在发育和感染中的作用仍不清楚。NbSLP2在家蚕微粒子虫成熟孢子中定位于孢壁周围,与NbSeptin2存在相互作用,但其具体功能尚不得知。基于前期研究未解决的NbSLP2在胞内增殖期的定位、功能及蛋白的可溶性表达等问题,本研究利用细胞感染体系,分析了NbSLP2在细胞内增殖期的表达模式和亚细胞定位,通过酵母信号肽捕获系统鉴定了NbSLP2的分泌性和信号肽序列;通过条件优化,获得了可溶性表达的NbSLP2并明确了其蛋白酶活性。本研究采用定量PCR法分析了Nbslp2在家蚕微粒子虫感染家蚕胚胎细胞Bm E后12,24,36,48,72,96h的转录模式,结果显示Nbslp2从感染早期开始检测到转录,在感染后48小时即形成孢子过程中达到最高水平。间接免疫荧光分析表明,NbSLP2可定位于孢原质膜和母孢子,且在增殖期可能分泌到宿主细胞质中。我们利用生物信息学工具signal-3L2.0对NbSLP2信号肽进行了预测,采用酵母信号肽捕获系统（Yeast secretion trap system）验证了信号肽的功能,证实NbSLP2是一种分泌型蛋白酶。通过采用大肠杆菌系统异源表达NbSLP2,在30℃,0.5 mM IPTG,180 rpm培养12 h条件下获得可溶性表达的rNbSLP2。采用酪蛋白酶谱法分析了rNbSLP2的蛋白酶特性,并证明其是一种Ca2+离子依赖性的蛋白酶。总之,我们的研究结果表明,NbSLP2是一种具有分泌性的蛋白酶,具有Ca2+离子依赖性,NbSLP2在家蚕微粒子虫的细胞内增殖期具有转录和表达,且可能分泌到宿主细胞质中发挥功能。本研究为后续开展NbSLP2的酶激活条件、酶活特性、底物鉴定及功能研究奠定了重要基础。