【摘 要】
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目的:乳腺癌是全球范围内女性患病率最高的癌症,也是导致我国女性癌症死亡的首要因素。SUMO特异性蛋白酶（SENPs）是细胞内SUMO稳态维持的核心调控因子。SENP3是SENPs家族成员之一,它通过介导靶蛋白的去SUMO来调节各种胞内蛋白的功能。研究表明,SENP3在头颈癌、胃癌、肺癌等多种癌症中异常表达,并导致细胞增殖、迁移等细胞过程发生异常;但其在乳腺癌增殖和迁移中的功能并不清楚。基于我们前期
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目的:乳腺癌是全球范围内女性患病率最高的癌症,也是导致我国女性癌症死亡的首要因素。SUMO特异性蛋白酶（SENPs）是细胞内SUMO稳态维持的核心调控因子。SENP3是SENPs家族成员之一,它通过介导靶蛋白的去SUMO来调节各种胞内蛋白的功能。研究表明,SENP3在头颈癌、胃癌、肺癌等多种癌症中异常表达,并导致细胞增殖、迁移等细胞过程发生异常;但其在乳腺癌增殖和迁移中的功能并不清楚。基于我们前期利用公共数据库对不同亚型乳腺癌组织中SENP3表达变化的分析结果,本论文旨在探讨SENP3对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制,以期为SENP3在乳腺癌中的功能研究补充一定内容。方法:利用公共数据库分析SENP3在乳腺癌及其亚型中的表达变化及其与临床指标的相关性;利用Western Blot确定不同亚型乳腺癌细胞系（Lum A型MCF-7和三阴性乳腺癌型MDA-MB-231、HS-578T）中内源性SENP3的表达及其与细胞本底增殖和迁移能力的相关性;之后利用慢病毒侵染构建SENP3稳定敲低的乳腺癌细胞系,通过克隆形成、CCK-8和细胞划痕实验进行细胞增殖及迁移对比分析,并检测SENP3敲低对乳腺癌细胞增殖和迁移相关蛋白（P21、P15、PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin）的表达变化;进一步通过在SENP3敲低的细胞中重新过表达野生型SENP3或去SUMO化修饰功能缺失突变型SENP3（C526A）,分析SENP3对乳腺癌细胞增殖的影响是否依赖于其去SUMO化修饰功能;最后利用双荧光素酶报告实验确定SENP3对促癌因子STAT3和抑癌因子P53介导的下游信号转导的影响。结果:1、与其他亚型的乳腺癌组织相比,三阴性乳腺癌组织中SENP3的m RNA和蛋白水平表达最高;且SENP3的高表达与三阴性乳腺癌这种临床恶性表型具有明显相关性。2、乳腺癌Lum A型细胞系MCF-7和三阴性乳腺癌型细胞系MDA-MB-231、HS-578T中均存在SENP3的内源性表达,且其蛋白表达水平与不同乳腺癌细胞的本底增殖和迁移能力有关。3、SENP3的敲低能抑制乳腺癌细胞的增殖,并伴随有P21、P15蛋白的表达上调;但对乳腺癌细胞的迁移以及N-cadherin和Vimentin蛋白的表达无影响。4、在内源性SENP3稳定敲低的乳腺癌细胞中,重新过表达野生型SENP3,而非去SUMO化修饰功能缺失突变型SENP3（C526A）,能逆转SENP3敲低对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。5、SENP3的敲低抑制了乳腺癌细胞中STAT3介导的下游信号转导过程,但对P53介导的下游信号转导无显著影响。结论:乳腺癌中上调的SENP3通过其去SUMO化修饰功能,调控包括STAT3促癌因子在内的某些靶蛋白介导的下游信号转导过程,抑制P21和P15的表达,促进乳腺癌细胞的增殖,最终实现对乳腺癌发生发展的潜在促进作用。
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