【摘 要】
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目的:探究黄芩苷（Baicalin）对急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia,ALL）细胞株Reh增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制,旨在为将Baicalin应用于ALL临床治疗提供新的策略以及理论参考。方法:将Reh细胞进行体外常规培养,绘制细胞生存曲线。Baicalin处理或联合凋亡抑制剂Z-VAD-FMK或活性氧（Reactive oxygen spec
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目的:探究黄芩苷（Baicalin）对急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia,ALL）细胞株Reh增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制,旨在为将Baicalin应用于ALL临床治疗提供新的策略以及理论参考。方法:将Reh细胞进行体外常规培养,绘制细胞生存曲线。Baicalin处理或联合凋亡抑制剂Z-VAD-FMK或活性氧（Reactive oxygen species,ROS）清除剂N-Acetyl-L-cysteine（NAC）共处理Reh细胞;Baicalin处理正常B淋巴细胞GM。MTS法检测Reh和GM细胞增殖,分析Baicalin毒副作用。流式细胞术检测Reh细胞凋亡率;免疫荧光实验观察凋亡细胞及其形态变化。DCFH-DA荧光探针检测Reh细胞内ROS水平。JC-1荧光探针检测Reh细胞内线粒体膜功能（Mitochondrial membrane potential,MMP）。Western Blot免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白表达。结果:（1）根据生存曲线,Reh细胞对数生长期为24-36 h;（2）MTS结果显示,与Control组相比,Baicalin显著抑制Reh细胞增殖（P＜0.01）;（3）MTS结果提示,在浓度≤40 mg/L时,Baicalin对正常B淋巴细胞GM没有毒性;（4）流式结果表明,相比Control组,Baicalin处理组细胞凋亡率明显升高（P＜0.01）;（5）免疫荧光结果显示,Baicalin促进Reh细胞凋亡,凋亡细胞的细胞膜发生皱缩;（6）Western Blot结果表明,与Control组相比,Baicalin可明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2（P＜0.05）和存活蛋白Survivin表达（P＜0.01）,同时促进Cleaved-caspase3/7以及Cleaved-PARP表达（P＜0.01）;（7）流式、Western Blot和MTS结果显示,相比Baicalin单独处理,联合处理组（Baicalin+Z-VAD-FMK）细胞凋亡率显著降低（P＜0.01）,Cleaved-caspase3/7（P＜0.01）及Cleaved-PARP（P＜0.01）表达均显著下调,Survivin表达明显恢复（P＜0.01）,细胞增殖显著恢复（P＜0.05）;（8）流式结果显示,与Control组相比,Baicalin处理组细胞内ROS水平显著升高（P＜0.01）,线粒体膜功能（MMP）明显受损（P＜0.01）;（9）流式和MTS结果显示,与Baicalin单独处理组相比,联合处理组（Baicalin+NAC）细胞内ROS水平以及凋亡率显著降低（P＜0.01）,清除ROS明显恢复细胞增殖（P＜0.05）;（10）Western Blot结果表明,与Control组相比,Baicalin处理组P-JNK和P-p38表达显著升高（P＜0.01）,联合处理组（Baicalin+Z-VAD-FMK）P-JNK,P-p38表达显著降低（P＜0.01）,联合处理组（Baicalin+NAC）P-JNK,P-p38（P＜0.01）,Cleaved-caspase3（P＜0.01）,Cleaved-PARP表达显著降低（P＜0.05）,Survivin表达显著恢复（P＜0.01）;（11）Western Blot结果显示,Baicalin处理组P-PI3K,P-AKT,P-m TOR蛋白表达显著下调（P＜0.01）,联合处理组（Baicalin+Z-VAD-FMK）PI3K-AKT-m TOR通路蛋白表达显著恢复（P＜0.01）。结论:本研究在细胞水平证实Baicalin一方面促进线粒体ROS产生并释放至胞质激活JNK/P38通路,活化的JNK/P38激活Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡;另一方面Baicalin通过抑制PI3KAKT-m TOR信号通路抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。
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