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一氧化氮(nitric oxide, NO)是调节疼痛的重要介质, 一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)是生成NO的限速酶。根据其激活机制和功能的不同，NOS可分为3种生化型，即神经元型NOS(neuronal NOS, nNOS)、诱导型NOS(inducible NOS, iNOS)和内皮细胞型NOS (endothelial NOS, eNOS), 这三种NOS 是3种不同基因的产物，各具不同的生物学效应。有文献报道大鼠甲醛炎性痛时nNOS增多，但iNOS表达是否增多尚不清楚。 越来越多的研究结果表明，胶质细胞在疼痛的产生和维持过程中起着重要的作用。很多伤害性刺激，如皮下炎性刺激、外周神经损伤、脊神经损伤、部分坐骨神经结扎、脊髓神经炎症等，可以激活脊髓后角星形胶质细胞和小胶质细胞。体外实验表明胶质细胞还可以被一些疼痛相关物质，如：ATP、钙离子基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)、兴奋性氨基酸、前列腺素、P物质等激活。胶质细胞激活后释放大量神经活性物质，如：一氧化氮、花生四稀酸、前列腺素、白介素、兴奋性氨基酸(包括谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸等)、神经生长因子、肿瘤坏死因子等。在脊髓，激活的胶质细胞还可以促进初级传入神经末梢释放P物质和兴奋性氨基酸而促进疼痛。尽管在很多疼痛过程，如脊髓损<WP=5>伤中，胶质细胞iNOS 表达增多，但在大鼠甲醛炎性痛中胶质细胞是否参与NOS表达的上调尚需证实。因此，本实验首先观察比较在大鼠甲醛炎性痛模型中不同时间点nNOS和iNOS表达的变化，然后观察胶质细胞代谢抑制剂氟代柠檬酸(fluorocitrate, FC)对 NOS表达的影响，确定甲醛炎性痛时表达增加的NOS的类型以及胶质细胞是否参与甲醛炎性痛时NOS表达的增加。1甲醛炎性痛时脊髓后角nNOS和iNOS表达的变化 雄性SD大鼠35只,随机分为5组, 分别为对照组和甲醛12h、24h、48h、72h组，其中甲醛12h、24h、48h、72h组大鼠分别于右后足底注射甲醛后相应的时间点断头取材，进行L5脊髓后角nNOS和iNOS免疫组化染色观察。 结果发现，L5脊髓后角nNOS免疫反应阳性细胞体积较小，多呈圆形、椭圆形、菱形集中分布在Ⅰ-Ⅱ板层。与对照组相比，注射甲醛后，12h、24h、48h、72h组同侧及对侧脊髓后角阳性细胞的数量及染色深度均显著增加(p<0.05),其中24h组增加最为明显其阳性细胞数量及染色深度较甲醛12h、48h、72h组也显著增加(p<0.01)。两侧脊髓后角相比较，注射甲醛后各组，注射部位同侧脊髓后角内nNOS免疫反应阳性细胞数量及染色深度均高于对侧(p<0.05)。注射甲醛后各组Ⅰ-Ⅱ板层阳性细胞突起染色深度均较对照组显著增加(p<0.05)。两侧相比较注射部位同侧脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层阳性细胞突起染色深度均较对侧显著增加(p<0.05)。 L5脊髓后角内iNOS免疫反应阳性细胞多呈菱形、圆形、椭圆形、散在分布于脊髓后角各板层和周围白质。同时发现有丝状免疫反应阳性物质散在分布于脊髓后角各板层和周<WP=6>围白质。与对照组相比，注射甲醛后，12h、24h、48h、72h组同侧及对侧阳性细胞的数量及染色深度均显著增加(p<0.01)，其中24h组增加最为明显。两侧脊髓后角相比较，注射甲醛后各组，注射部位同侧脊髓后角内iNOS免疫反应阳性细胞数量及染色深度均较对侧显著增多(p<0.05)。注射甲醛后Ⅰ-Ⅵ板层阳性细胞突起染色深度的变化趋势与阳性细胞胞体的变化趋势相类似。nNOS和iNOS表达都增多，且都在24h达到高峰但在表达上调和恢复的速度上存在一些差异。nNOS表达在12h就迅速升高接近高峰，48h时明显下降，而iNOS表达上升缓慢，12h 表达较少，但48h时仍有大量表达。2胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸对大鼠甲醛炎性痛时脊髓NOS表达的影响 雄性大鼠28只，随机分为对照组、甲醛24h组、甲醛+生理盐水(NS)组和甲醛+氟代柠檬酸(FC)组。甲醛24h组、甲醛+NS组和甲醛+FC组均于右后足底注射甲醛后24h断头取材，其中甲醛+NS组和甲醛+FC组于注射甲醛10分钟后鞘内注射1μl NS或1μl FC溶液(含1nmol FC)，然后注射10μl NS。NADPH-d组化法观测NOS的表达。结果表明：对照组脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层NADPH-d阳性细胞数目较少，染色较浅，左右两侧无明显差异。甲醛24h组和甲醛+NS 组阳性细胞的数量无明显差异，但均较对照组显著增加(p<0.01)。甲醛+FC组与甲醛24h组和甲醛+NS 组相比阳性细胞数目均明显降低(p<0.01) 但与对照组相比表达仍增高(p<0.01)。并且甲醛24h组、甲醛+NS 组和甲醛+FC组注射甲醛部位同侧阳性细胞数目均较对侧增加(p<0.05)。<WP=7>脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层阳性细胞突起NADPH-d染色深度的变化趋势与NADPH-d阳性细胞的变化趋势相类似。中央管周围灰质内阳性细胞数目及突起染色深度的变化趋势与后角相类似。 结论 甲醛炎性痛时脊髓后角nNOS和iNOS表达均增高，鞘内给予FC显著降低了NOS的表达，但仍高于对照组水平。这说明甲醛炎性痛时nNOS和iNOS均参与疼痛的调节，胶质细胞参与甲醛炎性痛时NOS表达的增多。