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目的利用重叠PCR合成风疹病毒E1全长基因,同时扩增E1主要抗原表位的基因序列,分别构建它们的原核表达载体并表达蛋白,为研发高灵敏度风疹ELISA诊断试剂奠定基础。方法对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化；设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,再用酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV E1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a获得pET32-RV E1克隆并测序；选取E1全长基因中195 aa-305 aa抗原肽基因序列进行扩增,再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a,获得重组质粒载体pET32-E1epitope测序鉴定。将重组原核表达载体pET32-RV El和pET32-E1epitope在大肠杆菌BL21(DE3)表达株中利用IPTG诱导蛋白表达并优化蛋白表达量, SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果1.分别进行了8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹E1全长基因3个片段；以酶切连接法将3个片段拼接成全长E1基因并克隆入pET32a,构建载体pET32-RV E1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符；构建获得重组质粒pET32-RV E1。在37℃下用终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测到预期的蛋白条带；2.以PCR扩增成功获得风疹E1抗原肽基因并构建重组质粒pET32-El epitope,测序结果正确；在37℃下以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导抗原肽表达,SDS-PAGE和Western blot检测到预期的蛋白条带；且以IPTG终浓度为0.1 mmol/L诱导6小时后表达量达到最高。结论成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV E1,表达完整E1蛋白；同时成功扩增风疹病毒E1抗原肽段基因,构建其原核表达载体pET32-E1epitope并表达该抗原肽。