【摘 要】
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目的:本研究通过建立HIBD模型,对Na+-K+-ATP酶和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca2+/calmodulin（Ca M）-dependent protein kinase II,Ca MKⅡ)表达随时间的变化进行研究,并借此探索新生儿缺氧缺血性损伤后离子转运调节机制。方法:选用新生约克夏猪共计28头,3-5日龄,体重1-1.5Kg,均为雄性。采用双侧颈动脉阻断、6%氮氧混合气通气40 m
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（No.81871408）； 国家自然科学基金青年基金（No.81801658）；
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目的:本研究通过建立HIBD模型,对Na+-K+-ATP酶和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca2+/calmodulin（Ca M）-dependent protein kinase II,Ca MKⅡ)表达随时间的变化进行研究,并借此探索新生儿缺氧缺血性损伤后离子转运调节机制。方法:选用新生约克夏猪共计28头,3-5日龄,体重1-1.5Kg,均为雄性。采用双侧颈动脉阻断、6%氮氧混合气通气40 min制作HIBD模型,以下简称模型组。对新生猪进行随机分组,对照组4头,为假手术组,即不进行缺氧缺血。模型组24头,进一步随机分为六个亚组（0-2h组,2-6h组,6-12h组,12-24h组,24-48h组,48-72h组）,每个亚组4头,模型组造模后,在上述固定时段内处死新生猪并取出脑组织固定、切片。对照组假手术后即刻取脑固定、切片。利用免疫荧光染色法及免疫组化染色法,分别在镜下观察对照组及模型组的Na+-K+-ATP酶、Ca MKⅡ的染色状况,采用NIKON图像采集系统,Image J软件对切片进行分析,以阳性表达所占的面积比Area（%）来反映Na+-K+-ATP酶、Ca MKII的表达情况。计算Na+-K+-ATP酶、Ca MKⅡ在各时点间的统计学差异,P＜0.05为有统计学差异,小数保留三位。结果:免疫荧光染色显示在缺氧缺血后脑内Na+-K+-ATP酶表达的变化趋势呈先减低,后增高,又逐渐减低的“横S型”,即自0-2 h开始降低,在6-12h时间段内表达最低,在其后的12-24h内恢复、随后又缓慢减低。对照组与0-2h,24-48h与48-72h之间未见明显差异（P＞0.05）,余各组与相邻两组均存在显著差异（P＜0.05）。免疫组化染色显示在HI后脑内Na+-K+-ATP酶表达的变化呈减低-增高-减低的趋势,2-6h与6-12h之间,12-24h与24-48h,24-48h与48-72h之间存在差异（P＜0.05）,余相邻两组未见明显差异（P＞0.05）。在缺氧缺血后Ca MKⅡ表达呈现减低-增高-减低-增高-减低的“双峰双谷”样改变,0-2h、6-12h为波谷,其中以6-12h为低,2-6h、24-48h为波峰,其中2-6h水平与对照组未见明显差异（P＞0.05）。对照组与0-2h之间;12-24h与24-48h之间未见明显差异（P＞0.05）,即使如此,6-12h至48-72h时段内仍存在增高-减低的趋势。余各组与相邻两组均见显著差异（P＜0.05）。结论:HI后Na+-K+-ATP酶及Ca MKⅡ表达随时间发生变化。其中,Na+-K+-ATP酶在HI后的新生猪脑内的表达大致呈“横S型”,Na+-K+-ATP酶表达在6-12h内最低。而Ca MKⅡ在HI后的新生猪脑内的表达大致呈“双峰双谷”样改变,即Ca MKⅡ表达在损伤后有一个轻微减低而后迅即升高,在缺氧缺血后2-6h出现一个和正常水平无明显差异的高峰,其后6-12h出现明显减低并达到最低值,然后逐步升高,二者共同参与了缺氧缺血后神经细胞的功能与状态的调节。
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