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目的通过四氯化碳(CCL4)以及低浓度酒精等复合因素诱导大鼠肝硬化的同时给予荜茇提取物溶液灌胃,观察与研究各组大鼠体重及精神状态、肝脏损伤程度、肝脏中肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达及肠道微生态的变化,来探讨荜茇提取物对大鼠肝硬化的防治作用及相关机理。方法动物分组将从内蒙古医科大学实验动物中心购买的60只雄性180-210g的SD大鼠随机分成空白组、肝硬化模型组、荜茇提取物高、中、低剂量组每组各12只。体重的测定全部5组大鼠每周俩次称量并记录体重。造模除空白组外其余各组大鼠均以0.35g/l苯巴比妥钠溶液为饮用水进行诱导,时间为1周。第2周、第3周分别以40%、50%的四氯化碳菜籽油溶液进行皮下多点注射,第4周到第14周造模结束以60%的浓度进行皮下多点注射,每次每只大鼠注射体积均为0.3ml/100g,每周2次并根据体重变化适当调整剂量,同时除空白组给与自来水外,其余各组均以10%的食用酒精溶液为其唯一饮用水,制模周期为14周。灌胃给药在相同的饲养环境下,造模的同时给与肝硬化模型组每日一次生理盐水灌胃,荜茇提取物高剂量组(66.7mg/kg),中剂量组(33.3mg/kg),低剂量组(16.6mg/kg)每日一次荜茇提取物溶液灌胃,连续灌胃14周,灌胃体积均为1ml/100g。大鼠日常状况实验期间观察并记录各组大鼠的体重、精神状态、粪便色泽等变化。形态学观察14周末给药结束,第15周开始处死各组大鼠并收集肝脏,应用苏木精-伊红染色法(Haematoxylin-eosin staining,HE)、马松三色染色法(Masson’s trichrome stain,MASSON)观察各组大鼠肝脏病理学变化,通过逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、免疫组织化学染色法检测各组大鼠肝脏中TNF-α、IL-6基因及蛋白的表达情况。肠道菌群测序从直肠中无菌收集粪便并通过二代测序检测各组大鼠肠道菌群的结构及丰度。结果第一部分1.大鼠日常状况空白组大鼠被毛光泽,食欲好,对外界刺激反应灵敏,粪便颜色正常,模型组大鼠被毛稀疏、干枯、无光泽,食欲及活动量下降,反应迟缓,第11周时开始有黑色粪便排出。高、中、低剂量组大鼠被毛和精神状态均有不同程度的改善。2.大鼠体重的变化空白组大鼠与模型组、各治疗组相比体重存在显著性的差异(P<0.05),各治疗组与肝硬化模型组之间存在显著性的差异(P<0.05),各治疗组之间体重差异较小,仅高剂量组与低剂量组间体重存在显著性的差异(P<0.05)。3.HE染色结果空白组大鼠可见肝细胞形态正常,肝细胞索排列整齐,小叶结构完整形态较好。肝硬化模型组大鼠可见大量肝细胞出现变性及空泡状坏死,脂肪性病变较为严重同时伴有炎性细胞浸润,肝细胞索排列混乱,大量纤维组织增生,肝小叶结构被破坏代之以假小叶形成提示模型建立成功。与模型组大鼠相比治疗组大鼠肝脏损伤程度明显减轻且随着荜茇提取物浓度的上升,肝细胞脂肪性变逐渐减轻。4.马松染色结果空白组大鼠肝细胞形态正常,围绕中央静脉呈放射状形式排列,未见有脂肪性病变及纤维化区域。模型组大鼠肝细胞出现变性及空泡状坏死,脂肪性病变及纤维化严重,肝小叶结构被破坏,假小叶形成。相比于模型组,治疗组大鼠肝脏纤维化程度普遍得到改善且随着荜茇提取物浓度的升高,肝细胞脂肪性病变及纤维化逐渐减轻。第二部分1.RT-PCR结果与空白组相比模型组中TNF-α、IL-6基因在肝脏中的表达显著升高(P<0.01),与模型组相比治疗组(高剂量组)中TNF-α、IL-6基因在肝脏的表达显著降低(P<0.01)。2.免疫组织化学染色检结果TNF-α及IL-6的免疫组织化学染色以肝细胞胞质中出现棕黄色颗粒为阳性表达。与空白组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6蛋白在肝细胞胞质内的表达均显著升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗组大鼠TNF-α、IL-6蛋白在肝细胞胞质内的表达均显著降低(P<0.05),并且随着荜茇提取物浓度的升高TNF-α、IL-6蛋白表达水平逐渐降低。第三部分1.肠道菌群测序结果适当剂量的荜茇提取物可以通过促进大鼠肠道内有益菌属的增长、防止肠道粘膜屏障的破坏进而发挥抗肝脏纤维化的作用。实验结论1.本课题通过皮下注射CCL4以及低浓度酒精的诱导成功建立肝硬化大鼠模型。2.荜茇提取物可以减轻由CCL4以及低浓度酒精所导致的大鼠肝细胞损伤和肝纤维化并且随着药物浓度的升高对肝脏的保护作用逐渐增强。3.荜茇提取物可通过降低促肝脏纤维化作用的TNF-α、IL-6基因及蛋白在肝脏中的表达,从而抑制肝纤维化进一步发展为肝硬化达到保护肝脏的作用。4.适当剂量的荜茇提取物通过促进大鼠肠道内有益菌属的增长、防止肠道粘膜屏障的破坏间接的为肝脏提供了保护。