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第一部分大肠癌患者外周血T细胞亚群的变化及功能研究【研究目的】:检测大肠癌患者外周血T细胞亚群变化及功能状态,探讨其在大肠癌中的免疫发病机制及影响因素。【研究方法】:苏州大学附属第一医院2005年11月至2006年7月收住普外科手术的35例大肠癌患者,与13例同期苏州大学附属第一医院门诊健康体检者对照。比较外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+CD28~+、CD8~+CD28~+、CD4~+CD25~+、CD3~+CD56~+T细胞亚群及CD4/CD8比例变化。收集相关临床资料,分析大肠癌患者T细胞变化的影响因素。【研究结果】:大肠癌患者外周静脉血淋巴细胞总数和比例与健康人无区别(P>0.05)。T细胞亚群分析CD4~+CD28~+T细胞百分比较正常对照组减少(P<0.05),而CD3~+CD56~+T细胞百分比较正常对照组升高(P<0.05),CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD8~+CD28~+、CD4~+CD25~+T细胞和CD4/CD8比值无变化。年龄≤60岁的大肠癌患者较>60岁的患者CD3~+T细胞显著减少(P<0.05),CD4~+CD28~+T细胞有减少趋势,但未达统计学意义(P=0.070);有淋巴结转移的患者较无转移的患者CD8~+、CD8~+CD28~+T细胞显著下降(P<0.05),CD3~+、CD4~+CD28~+T细胞有减少趋势,未达统计学意义(P=0.066,0.069);恶性肿瘤中度分化的患者较分化低和高的患者CD3~+ T细胞下降趋势(P=0.073);大肠癌患者随着肿瘤浸润深度的加重CD8~+、CD8~+CD28~+、CD3~+CD56~+T逐渐细胞减少(P<0.05);Dukes分期越晚的患者CD3~+T细胞减少越明显(P<0.05)。性别、肿块位于直肠或结肠的部位、肿块的大小对T细胞均未发现有影响。年龄与大肠癌患者的T细胞亚群相关性:大肠癌患者外周血CD3~+T细胞随年龄增大而减少,外周血CD3~+T细胞对年龄的回归方程为y=79.17-0.29x,r=0.302,P=0.093;大肠癌患者外周血CD4~+CD28~+ T细胞年龄增大而减少,外周血CD4~+CD28~+ T细胞对年龄的回归方程为y=42.97-0.33x,r=0.370,P=0.031。T细胞亚群间的相关性分析显示CD3~+T细胞与CD4~+、CD4~+CD28~+T细胞有直线回归关系(回归方程分别为y=20.48~+0.28x,y=-8.70+0.58x;r=0.373,0.553;P=0.036,0.001);CD4~+T细胞与CD8~+、CD4~+CD28~+、CD4~+CD25~+T细胞及CD4/CD8间有直线回归关系(回归方程分别为y=47.20-0.36x,y=2.72+0.56x,y=-0.79+0.11x,y=-0.59+0.05x;r=0.366,0.466,0.362,0.797;P=0.033,0.0001,0.006,0.036);CD8~+T细胞与CD4/CD8和CD8~+CD28~+、CD3~+CD56~+T细胞间有直线回归关系(回归方程分别为y=2.81-0.05x,y=-0.51+0.14x,y=-2.53+0.43x;r=0.755,0.386,0.346;P=0.0001,0.024,0.057);CD4/CD8与CD4~+CD25+T细胞间存在直线回归关系(回归方程为y=-0.12+2.75x;r=0.534;P=0.001);CD4~+CD28~+T细胞与CD8~+CD28~+T细胞间有直线回归关系(回归方程为y=0.85+0.14x;r=0.485;P=0.004)。【研究结论】: 1.大肠癌患者T细胞介导的抗肿瘤免疫反应处于抑制状态大肠癌患者T细胞亚群介导的免疫抑制状态与患者的年龄,淋巴结转移、肿瘤的分化程度、浸润深度、Dukes分期等密切相关。具体表现为有淋巴结转移、肿瘤分化程度低、局部浸润达浆膜和肠外的患者T细胞免疫功能下降明显,Dukes分期晚的患者T细胞总数下降明显。2.大肠癌患者的T细胞各亚群间相互影响,CD4~+、CD4~+CD28~+、CD8~+CD28~+、CD3~+CD56~+T细胞是活化T细胞;CD8~+T细胞、CD4~+CD25+抑制性细胞;CD4/CD8比值升高反应免疫活化。第二部分大肠癌患者围手术期外周血T细胞亚群变化及影响因素研究【研究目的】:检测大肠癌患者手术后1周至1月T细胞亚群变化及功能状态,探讨大肠癌术后免疫变化的影响因素。【研究方法】:对第一部分35例大肠癌患者中的30例术后1周再次采血检测,另15例非配对的患者为手术后1月采血检测。收集相关临床资料,分析大肠癌患者术后1周T细胞免疫功能变化的影响因素。【研究结果】:大肠癌患者手术后1周淋巴细胞总数和比例均较健康人和术前显著降低(P<0.05);手术前、手术后1月患者的淋巴细胞总数和比例较健康人均无差异。手术后1周CD4~+CD28~+T细胞较术前明显增多(P=0.029),近正常对照水平,至术后1月又降低近术前水平(P<0.05);CD8~+CD28~+T细胞术后1周较术前无明显变化,但较正常对照有降低趋势(P=0.079),术后1月又恢复;CD4~+CD25~+T细胞术后1周较术前升高(P=0.024),明显高于正常水平,术后1月继续升高;CD3~+CD56~+T细胞术后1周较术前无变化,仍高于正常人,术后1月仍持续升高(P<0.05)。CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞和CD4/CD8无变化(P<0.05)。女性大肠癌患者术后CD3~+、CD4~+CD28~+ T细胞较男性患者更高倾向(P=0.101,0.068);年龄≤60岁的患者较年龄>60岁患者术后CD3~+T细胞更高(P=0.061);结肠癌患者的CD3~+CD56~+T细胞水平较直肠癌术后增高更明显(P=0.035);术中至术后1周内输血的患者较未输血的患者CD4~+CD28~+ T细胞水平低(P=0.052);手术后曾使用糖皮质激素地塞米松的患者CD8~+CD28~+ T细胞水平降低,而未使用的则升高,两者有显著差异(P=0.015),CD4~+CD25~+T细胞都升高,但使用地塞米松的患者CD4~+CD25~+T细胞升高更明显(P=0.008);有腹腔局部淋巴结转移的患者较无淋巴结转移的术后CD3~+T细胞低(P=0.008),有淋巴结转移的患者术后CD8~+ T细胞降低、CD4/CD8比值升高,而无淋巴结转移的患者术后CD8~+ T细胞升高、CD4/CD8比值降低(P=0.012,0.019);肿瘤细胞分化程度高的患者较分化程度低的患者术后CD3~+CD56~+T细胞有上升趋势(P=0.066);肿瘤局部浸润限于肌层以下者较浸润超过肌层者术后CD8~+ T细胞升高明显(P=0.022),浸润限于黏膜及以下者术后CD3~+CD56~+T细胞降低,而达肌层和超过肌层的患者术后CD3~+CD56~+T细胞升高,浸润深度浅的患者CD3~+CD56~+T细胞水平更高(P=0.012);Dukes分期C、D期患者术后CD3~+、CD8~+ T细胞升高更明显(P=0.022,0.037),C、D期患者较A、B期患者CD4/CD8比值、CD4~+CD28~+ T细胞有升高更明显趋势(P=0.097,0.098);但T细胞亚群整体水平仍较A、B期低。【结论】:1.手术后1周至1月大肠癌患者的CD4~+CD28~+、CD8~+CD28~+T细胞介导的抗肿瘤免疫有波动,CD4~+CD28~+T细胞先活化后抑制,CD8~+CD28~+T细胞先抑制后恢复,而Treg细胞、NKT细胞术后1周至1月持续上升。2.女性、年轻、分化程度高、浸润浅、结肠癌患者是大肠癌术后T细胞免疫功能恢复的有利因素;原有淋巴结转移、术中术后输血、使用糖皮质激素是大肠癌术后T细胞免疫功能恢复的不利因素。