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研究背景:宫颈癌(Cervical cancer)是妇科三大恶性肿瘤之一,主要病理类型分为宫颈鳞状细胞癌和宫颈腺癌,占女性癌症患者死亡原因的第4位,腺癌比鳞状细胞癌的预后差,一直是宫颈癌方面研究的热点。本研究拟应用RNA干扰技术高效特异性沉默Rsf-1/HBXAP基因,联合放化疗三重作用杀伤人宫颈腺癌Hela细胞,以增强人宫颈腺癌Hela细胞系体外放化疗敏感性,为基因靶向分子放化疗作为宫颈癌新的治疗模式提供实验依据。方法:利用小分子干扰RNA(siRNA)转染人宫颈腺癌Hela细胞系,采用荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Rsf-1/HBXAP mRNA在瞬时转染后的表达水平,Western Blot技术检测Rsf-1/HBXAP蛋白的表达情况。采用CCK-8实验检测瞬时转染后人宫颈腺癌Hela细胞系对紫杉醇以及顺铂耐药性的变化,平板克隆实验检测人宫颈癌Hela细胞系放疗敏感性,流式细胞术检测人宫颈癌Hela细胞系在放化疗后的凋亡及周期情况。结果:qRT-PCR结果表明,转染了siRNA-1的Hela细胞,其Rsf-1/HBXAPmRNA相对表达量显著降低,干扰﹥50%;而siRNA-2及NC对Hela细胞Rsf-1/HBXAP的干扰﹤50%,siRNA-1可在mRNA水平显著抑制Rsf-1/HBXAP基因的表达。Western Blot结果表明,siRNA-1可在蛋白水平显著抑制Rsf-1/HBXAP基因的表达。CCK-8结果显示,Rsf-1/HBXAP siRNA-1转染48h后,在紫杉醇浓度为0.0、2.5、5.0、7.5、10.0nM下细胞存活率分别为99%、80%、43%、17%、7%,而对照组在紫杉醇浓度为0.0、2.5、5.0、7.5、10.0nM下细胞存活率分别为100%、90%、78%、40%、16%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。紫杉醇对siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP组与非干扰组的IC50分别为7.24nM(95%可信区间:[3.14,18.60])和3.66nM(95%可信区间:[1.65,7.86])。siRNA-1转染后,顺铂浓度为0、0.1、1μg/ml下培养24、48、72小时,采用CCK-8实验检测Hela细胞对顺铂敏感性的变化,结果表明,与对照组siRNA-NC相比,转染siRNA-Rsf-1/HBXAP后,Hela细胞增殖减慢,对顺铂敏感性增强。平板克隆实验结果表明,在辐照剂量为0、2、4Gy下siRNA-1细胞克隆形成率分别为93%、24%、5%,而对照组在辐照剂量为0、2、4Gy下对照组细胞克隆形成率分别为95%、52%、13%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。与对照组比较,放疗以剂量依赖性显著抑制siRNA转染Hela细胞平板克隆形成。在顺铂浓度为0、0.1、1μg/ml培养条件下,与对照组siRNA-NC相比,转染siRNA-Rsf-1/HBXAP后,Hela细胞克隆形成能力降低,对顺铂敏感性升高。流式细胞术结果显示,在放化疗处理48小时后,Rsf-1/HBXAP siRNA-1转染的Hela细胞凋亡率显著高于对照组Hela细胞,siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP基因可促进细胞凋亡。细胞周期结果显示,与对照组siRNA-NC相比,转染siRNA-Rsf-1/HBXAP后,Hela细胞S期比例显著升高,发生S期阻滞,对顺铂敏感性升高。结论:siRNA通过抑制Rsf-1/HBXAP基因表达增加人宫颈腺癌Hela细胞系放化疗敏感性,提示Rsf-1/HBXAP基因可能为宫颈腺癌放射治疗抵抗性及化疗不敏感产生的原因之一,Rsf-1/HBXAP基因可能成为宫颈腺癌治疗的潜在靶点,为基因靶向分子放化疗作为宫颈腺癌新的治疗模式提供了实验依据,为以Rsf-1/HBXAP基因为宫颈癌治疗靶点提供了理论依据。