桑叶抑制酪氨酸酶活性成分的研究

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长期以来,色素沉着现象一直是困扰人类皮肤的一大问题,虽然对人们的健康和生命没有太大的影响,但这些皮肤亚健康的状态却令很多人苦恼。尤其近年来随着生活、工作节奏的不断加快,作息无规律性,以及由于污染而引起的环境和臭氧层的破坏,从而导致患有各种黑色斑症状的人群日趋增多。抗氧化剂和美白剂从基因水平上加强皮肤的正常生理功能,延缓皮肷的衰老,祛除或减轻色素沉着现象,已在化妆品领域广泛使用。从天然植物中寻找低毒、高效的美白活性成分已成为该领域研究的一个重要方向。桑叶,桑科落叶乔木桑树(Morus alba L.)叶,作为国家卫生部批准的药食两用原料,安全性好,无副作用,早已在民间广泛应用。近年来,各国研究人员对桑叶的组成、功能和作用机理进行了系统的研究,结果发现桑叶中含有丰富的氨基酸、维生素、纤维素、矿物质以及多种生理活性物质,具有降血糖、降血压、降血脂、抗氧化、抗衰老等多种功效。据文献报道桑叶的乙醇提取物对酪氨酸酶活性有一定的抑制作用,但桑叶有效成分对抑制酪氨酸酶活性的研究尚未见确切报道。为了进一步探索并研究桑叶中的抗氧化、抑制酪氨酸酶活性的有效成分,本实验采用DPPH、ABTS法和Dopa oxidase法,以抑制率为活性指标对桑叶中的抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性成分进行了较为系统地研究。本实验对桑叶乙醇提取物经过溶剂梯度萃取得到—石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。通过查阅文献黄酮类有效成分主要集中在乙酸乙酯萃取部分,再分析桑叶中的系列化学成分的基础上,筛选出有效部位为乙酸乙酯萃取物,并对有效部位进行了化学成分的分离结构鉴定和单体化合物的抗氧化和酪氨酸酶活性抑制试验。实验结果表明:(一)采用反复硅胶柱层析对乙酸乙酯萃取物进行进一步的分离,共得到7个晶体化合物。根据理化性质、以及1H-NMR、13C-NMR和MS等波谱数据分析鉴定了7个已知化合物的结构,它们分别是:β-谷甾醇(β-sitosterol)(1)、辛酸octanoic acid (2)、胡萝卜苷(daucosterol)(3)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)(4)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)(5)、槲皮苷(quercitrin)(6)、桑黄素-3-O-β-D-葡萄糖苷(morin-3-O-β-D-glucopyranoside)(7)。(二)在分析鉴定化合物的基础上,对量较多的化合物4和化合物5进行进一步的酸水解得到化合物8和化合物9,与已知标准品对照TLC,以及1H-NMR数据与文献对照,由此推断化合物8和化合物9的结构,分别为kaempferol(8)、quercetin(9)。(三)对化合物4、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8和化合物9进行酪氨酸酶活性的抑制试验结果表明,化合物8和化合物9均对酪氨酸酶活性有较好的抑制作用,以arbutin作为阳性对照,发现化合物8和化合物9的抑制率大于arbutin,且其IC50值要明显小于arbutin。(四)对化合物4、化合物5、化合物6和化合物7采用DPPH和ABTS法进行抗氧化试验结果表明,四个化合物均对DPPH自由基和ABTS+自由基具有较好的清除作用,清除率的最佳效果与浓度有关,其中化合物4的IC50值最小,分别为4.2 ppm和3.6 ppm。
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