【摘 要】
：
首先,基于生物信息学预测和Northern blot验证获得华癸中慢生根瘤菌（Mesorhizobium huakuii）7653R的一个small RNA（sRNA）SraG。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,分别利用RNAfold和Inta RNA软件预测了SraG二级结构和靶位点,进一步构建了M.huakuii 7653R的SraG插入失活突变体SraGmut,并对
论文部分内容阅读
首先,基于生物信息学预测和Northern blot验证获得华癸中慢生根瘤菌（Mesorhizobium huakuii）7653R的一个small RNA（sRNA）SraG。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,分别利用RNAfold和Inta RNA软件预测了SraG二级结构和靶位点,进一步构建了M.huakuii 7653R的SraG插入失活突变体SraGmut,并对突变体接种紫云英的共生固氮表型进行检测。盆栽实验结果显示,与野生型菌株7653R相比,接种突变株SraGmut的固氮能力显著下降,突变株固氮酶活性下降约40%,植株地上部分生物量和根瘤数量也显著降低。结果表明SraG的功能与7653R的共生固氮过程相关,作为sRNA可能参与根瘤菌的共生固氮调控过程。同时,本文对自生、微氧、共生固氮期和共生固氮晚期四个不同培养条件处理的7653R进行了转录组高通量深度测序（＜500nt）,比较分析和筛选了7653R中特异表达的sRNA。并且选择其中的6个sRNA进行了Northern blot验证。结果显示:在自生条件下表达的有Mh CY40,Mh CG27,Mh CG40,Mh CG12;在微氧条件下表达的有Mh CY40,Mh CG27,Mh CG12;在共生固氮期表达的有Mh CG27,Mh CG40,Mh CG12,Mh AG19;在共生固氮晚期表达的有Mh CG27,Mh CG40,Mh CG12,Mh AG19,Mh CG13。结合靶位点预测和文献分析,本文推断Mh CY40可能在早期固氮过程中发挥功能;Mh CG40可能直接参与根瘤菌共生固氮过程;Mh CG12和Mh CG27可能参与生物体的供能过程;Mh AG19可能在共生固氮期发挥功能;Mh CG13可能在共生固氮晚期发挥功能。另外,本文构建了双质粒报告系统,在根瘤菌中验证了一个目标sRNA与其预测靶基因之间的互作;进行了sRNA的体外转录实验和Hfq蛋白的超表达纯化,为后续进行EMSA实验提供了工作基础。
其他文献
胚胎着床是具有活性的囊胚与可接受子宫建立联系的过程,是影响妊娠过程的主要环节。这个过程受到许多的因素调控,而miRNA也参与了这个过程的调控。本试验以妊娠早期第9天、12天和15天以及空怀12天猪子宫内膜为研究对象,每个阶段3个生物学重复,进行miRNA高通量测序。研究结果如下:1.通过高通量miRNA测序,妊娠不同阶段比较后共获得106个差异miRNA。我们在妊娠9天与空怀12天子宫内膜中没有发
现代猪生产中饲料成本约占总成本的70%,提高猪饲料转化效率,节约饲料成本,是提高生猪养殖效益的重要手段。骨骼肌是猪机体最大的组织,所消耗的能量约占总代谢的60%,降低猪骨骼肌能量代谢是提高饲料效率的重要途径。MiRNAs（miRNAs）是一类保守的、长度大约为20-24个核苷酸的微小RNA,它主要通过降解靶标基因的m RNA或者抑制其m RNA的翻译水平进而负调控基因的表达。乳酸脱氢酶（LDH）、
肛门闭锁（Anorectal Atresia;AA）是一种常见的新生仔猪先天性直肠末端发育缺陷,因胚胎期尾端发育异常,肛门没有形成,造成直肠在体表没有开口。猪肛门闭锁自然发生率高达0.1-1.0%,患病公仔猪通常在出生后1-3天内死亡,母仔猪在出生后一月内死亡50%,对养猪生产造成较大经济损失。另外,肛门闭锁在新生儿中发病率高达1/5000,因此,从分子水平探索肛门闭锁的致病基因及其发病机制具有十
猪是我国的主要肉食来源。猪体内脂肪沉积过多不仅降低肉产品质量,而且还会对猪的生长和繁殖性能产生影响。猪胴体性状能够有效的反应出猪胴体的脂肪含量和瘦肉率,因此,研究猪胴体性状的遗传机理具有重要意义。本研究以巴克夏×约克夏F2资源群体为研究对象,应用Porcine SNP60K芯片,采用紧缩混合线性模型（CMLM）,在全基因组范围内进行关联分析,筛选影响猪胴体性状的候选基因,为标记辅助选择提供基因标记
目的:研究脑血管介入治疗患者术后常见并发症原因及护理对策。方法:2020年8月至2022年8月,纳入脑血管介入治疗的患者74例。分组执行随机数字表法,2组各37例。参照组:常规护理。试验组:循证护理。检验各组护理结果。结果:干预后,试验组生活质量评分更高,护理满意度、并发症恢复情况优于参照组,P＜0.05。结论:对脑血管介入治疗患者术后常见并发症的原因进行分析,并采取合适的护理对策,有助于加快各并
苹果再植病广泛分布于全球各地,严重制约了苹果产业的发展,克服重茬胁迫是促进世界苹果产业发展的关键。目前普遍认为选择适合当地的抗性砧木是最有效的方法之一。因此,本研究以陕西省宝鸡市千阳县苹果园作为研究对象,首先分析了苹果园种植年限对土壤微生物及土壤养分的影响,然后,在明确不同树龄苹果园土壤微生物群落演替特征的基础上,通过比较研究不同苹果砧木对于重茬障碍土壤（20年果园种植）的耐受差异性,分析重茬胁迫
猪链球菌是一类致病性革兰氏阳性菌,在世界范围内广泛分布,对养猪业造成了巨大损失。同时,猪链球菌也会导致人类感染,表现出脑膜炎,败血症和关节炎等多种临床症状。1998年和2005年,猪链球菌病疫情在我国人群和猪群中的两次大规模爆发,导致了严重的人员伤亡和经济损失。近年来,随着猪链球菌病被关注程度的提高和流行病学研究的发展,越来越多的人感染猪链球菌的病例被报道出来。因此,猪链球菌不仅危害养猪业,也具有
植物的Argonaute（AGO）蛋白可以与小RNA结合形成RNA诱导沉默复合体（RISC）,参与维持基因组稳定,调控生长发育以及对逆境的适应性应答等生理活动。水稻基因组中共有19个AGO基因,但对其功能研究较少。本课题利用水稻AGO基因的突变体和RNAi转基因植株研究OsAGOs基因的生物学功能,为进一步阐述小RNA途径调控水稻的生长发育提供线索,也为水稻的遗传改良提供基因资源。主要结果如下:1
中国是农用地膜使用大国,但农膜厚度较小,难以回收,形成了“白色污染”。农田“白色污染”会对土壤及作物带来多种负面影响,为减少塑料污染带来的环境压力,微生物温和的降解作用有望缓解这一问题。本研究以聚乙烯地膜塑料圈为研究对象,利用16S r RNA扩增子测序技术,结合可培养微生物分离技术,探究了塑料圈细菌群落的演替规律,并筛选出了高丰度聚乙烯地膜降解菌。通过多菌株混合共培养,测定细菌共培养后聚乙烯地膜
DNMT2是DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）家族的一员。DNMT2是否甲基化DNA一直有争议,但可甲基化t RNA的38位胞嘧啶,生成5-甲基胞嘧啶（5-methyl cytidine,m5C）。m5C这一修饰不仅可以防止t RNA在应激状态被剪切,而且可以维护并促进t RNA的功能,提高与转录调控及基因表达相关蛋白的翻译速度。许多文献表明,DNMT2对应激