翡翠贻贝珍珠层水溶性提取物调控人牙釉质仿生再矿化的体外研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:simwwx
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牙釉质是一种复杂的生物材料,其中96%(质量分数)以上由羟基磷灰石(hydroxyapatite, HAP, Ca10(PO4)6(OH)2)晶体构成,有机物约占1%[1]。在牙釉质发育过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白(amelogenin)是最主要的釉质基质蛋白(enamelmatrix proteins, EMPs),在釉质基质中含量可高达90%。在EMPs的调控下,HAP晶体平行排列成束状,形成釉柱,进而形成牙釉质[2]。然而,成熟牙釉质中却不存在成釉细胞和釉质基质蛋白。这也意味着,牙釉质脱矿后将无法自行修复。牙釉质的特殊分级结构使其比单晶HAP具有更高的硬度、强度和抗磨耗性能,同时也增加了重建与修复牙釉质的难度。临床上常采用含氟制剂促进早期脱矿釉质的再矿化。然而,有研究表明再矿化治疗后釉质表面附着沉积物,主要成分为微晶离子和非晶型的氟化钙(CaF2)及非特异性氟吸附物(NSAF)[3],形态和成分能都与釉质的有序分级结构相差甚远,远无法满足修复牙釉质的需要。为了得到有序排列的HAP,有研究通过溶胶凝胶法[4]、电化学沉积[5]、外磁场[6,7]以及水热反应[8](包括极端苛刻的温度、压强和pH值)等方法快速合成有序排列的HAP。然而,这些方法反应条件苛刻,且成本较高。笔者注意到,自然界众多生物矿物中,软体动物贝壳的珍珠层(nacre)与牙釉质有许多相似点。珍珠层位于软体动物贝壳内层,由95%(质量分数)的碳酸钙文石晶体和1~5%有机基质[9]构成。珍珠层水溶性基质(water solution matrix, WSM)的作用与釉质中釉原蛋白相似:作为碳酸钙晶体的成核位点,WSM调控碳酸钙晶体矿化,限制晶体厚度,并决定晶型和晶体尺寸[10]。于是,有学者进一步探索珍珠层对骨骼中HAP的作用,发现珍珠层是一种良好的骨诱导材料,可以在体内[11,12]和体外[13,14]诱导骨形成。Lopez[15]等证明珍珠层比HAP更快诱导骨组织矿化形成。Lamghari[16]等提出WSM在骨诱导中的作用与骨形态生成蛋白(BMP)或诱导骨生长的转化生长因子(TGF-β)相似。Ni等[17]发现,珍珠层在室温下可以通过在磷酸缓冲液中转化为HAP。然而,关于翡翠贻贝珍珠层WSM对牙釉质再矿化作用的研究尚未见报道。WSM能稳定更多的钙磷离子、来源广泛、制备简单、价格低廉等优点,使其有望成为牙釉质再矿化的促进因子。基于上述想法,本文通过提取廉价翡翠贻贝珍珠层中的WSM蛋白作为矿化模板,尝试在仿生环境下对脱矿牙釉质表面进行原位诱导HAP生长,以期合成高度有序排列的HAP晶体,与天然牙釉质硬度相当的再矿化层。通过系列的对比试验,探讨在WSM存在下HAP矿化层表面形貌、晶体物相以及机械性能,探讨WSM对脱矿牙釉质再矿化的调控机制。本研究可望为开发新型釉质修复材料提供了理论依据。目的:探索翡翠贻贝珍珠层WSM对脱矿牙釉质的仿生再矿化的调控作用,为新型牙科材料的研发提供理论依据。方法:从翡翠贻贝珍珠层中提取WSM,采用傅立叶红外线光谱仪(Forrier-Transforminfra-red,FTIR)分析WSM提取物的化学基团,并用BCA法测定WSM中蛋白质含量。将新鲜拔除的人前磨牙切片,酸蚀脱矿,以构建牙釉质脱矿模型。以WSM为矿化模板,诱导脱矿釉质表面再矿化。应用X线衍射仪(X-ray diffraction, XRD)鉴定样本表面新生晶体物相;采用FTIR分析新生晶体的化学基团;通过扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察釉质样本表面形貌;应用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)观察矿化表面形貌以及分析样本表面的粗糙度;应用显微数字硬度计测量矿化前后釉质样本表面维氏硬度值(Vickers hardness, HV),通过SPSS17.0进行统计分析。结果:XRD图谱证实,再矿化晶体主要成分为HAP晶体,添加WSM蛋白后结晶度比未添加WSM更好,且接近天然釉质。FT-IR图谱表明,添加WSM蛋白后,矿化生成的HAP晶体中含有碳酸根(CO32-)和磷酸基团(PO43-)。通过SEM和AFM分析,未添加WSM蛋白生成的晶体大小不均,排列松散、无序;添加WSM蛋白后生成的晶体大小均匀,紧密而有序排列,与天然釉质相似,且粗糙度和显微硬度也与明显高于未添加WSM蛋白组,接近于天然牙釉质。结论:综上所述,翡翠贻贝珍珠层WSM可作为人牙釉质仿生矿化有机模板,能有效摄取模拟体液中的钙磷等离子,调控HAP有序矿化生长。本研究为早期龋的防治、边缘微渗漏问题的研究、牙本质过敏症的治疗提供新的理论依据。
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