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肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤,近年该病的发病率呈升高趋势。肾癌细胞具有增殖、迁移和侵袭能力,这些作用是肾癌扩散、转移的生物学基础。因此在更深层次特别是在分子水平研究肾癌的增殖、迁移,对于肾癌的发病机制、进展过程及治疗方案均有重要意义。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型糖基化磷蛋白,该蛋白参与构成细胞外基质成分,并与多种细胞膜蛋白发生偶联,参与细胞的迁移及运动过程。该蛋白的异常表达已被证明与多种疾病有关。然而,OPN与肾癌的关系尚不清楚,本研究通过探讨OPN与肾癌增殖、侵袭的关系,旨在揭示该蛋白在肾癌发病过程中的重要作用,并为今后肾癌的药物治疗提供新的靶点。 方法: 1免疫组织化学染色 将组织切片脱蜡至水,使用SP三步法检测组织切片中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及OPN的表达变化 2组织总RNA提取及RT-PCR反应 提取各组织的总RNA,经定量、电泳验纯后进行逆转录反应,之后将反应产物用特异引物进行PCR扩增。经电泳后半定量检测PCNA及OPN的表达变化。 3人肾癌786-0细胞培养 将786-0细胞传代培养,待细胞生长至80%时进行实验。 4细胞增殖实验 使用MTT法对各组细胞的增殖活力进行测定,检测OD570值比较各组间增殖活力差异。采用细胞计数法,对各组细胞进行计数,以验证OPN对786-O细胞增殖的影响。 5细胞侵袭实验 将各组细胞传代至Transwell的上室,在下室浸没的溶液中并加入不同浓度的OPN,计数侵袭入下室薄膜上的细胞个数。 结果: 1 OPN表达水平与肿瘤细胞增殖能力相关 免疫组织化学及RT-PCR分析结果表明,PCNA及OPN在肾癌组织中的表达均高于癌旁肾组织(P<0.01)。且PCNA及OPN的表达强度随临床分级的升高而增强。PCNA的表达水平与OPN表达水平有关(P<0.01),因此,OPN的表达水平与肿瘤的增殖能力可能有关。 2 OPN增强786-O肾癌细胞的增殖能力 MTT及细胞计数结果表明,用人重组OPN蛋白对786-O细胞进行处理,细胞的增殖活性明显增强,细胞数目明显增多(P<0.05)。 3 OPN增强786-O肾癌细胞的侵袭能力 Transwell实验结果表明,用不同浓度的OPN处理786-O肾癌细胞,侵袭入下室的细胞数目明显增多(P<0.05),因此推测OPN与肾癌细胞的侵袭有关。 结论: 1 OPN的表达水平与肾癌细胞的增殖能力成正相关。 2 OPN增强肾癌细胞的增殖及侵袭能力。