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研究目的:本研究应用化学性肝毒剂D-Gal N制造急性肝衰竭大鼠模型,通过观察给旺-9对D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠一般情况、肝功指标、肝脏病理学变化的影响以及对D-Gal N诱导急性肝衰竭大鼠存活率及存活时间,阐明给旺-9对D-Gal N诱导急性肝衰竭大鼠预防作用及治疗作用。研究方法:1.给旺-9对大鼠D-氨基半乳糖急性肝损伤的保护作用SPF级雄性SD大鼠72只,将大鼠随机分为六组:正常对照组、模型组、阳性(美能)组、蒙药给旺-9低、中、高剂量组各12。适应性喂养3天。蒙药给旺-9组和美能组给0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解相应药物。给予相应药物灌胃20ml/kg每日一次,连续给药10天。阳性对照组:0.45g/kg;给旺-9高、中、低剂量组各1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg;空白组与模型组给予等容量0.5%CMC-Na溶液。禁食12h,末次给药后2小时,除空白组外,其余各组大鼠单次腹腔注射600mg/kg D-Gal N进行造模,正常组注射等量生理盐水。造模后观察各组大鼠一般情况,D-Gal N造模48h腹腔注射10%水合氯醛麻醉,腹主动脉采血,用生化法测定血清ALT,AST,D-Bil,T-Bil,TP,ALB,CHE,的含量。用血浆分析法检测PT、APTT。取肝组织观察肝脏色泽、瘢痕、形状,将肝右叶固定于10%甲醛溶液固定,HE染色、显微镜下观察组织形态学变化。动物处死前24h禁食不禁水。2.给旺-9对大鼠D-Gal N急性肝损伤的治疗作用分组与给药剂量与试验相同,各组大鼠均腹腔注射1 D-Gal N 600mg/kg进行造模,药物剂量与实验相同,造模1 2h开始灌胃给药,正常组及模型组给予0.5%CMCNa溶液,其他组分别给予相应剂量的药物,1天1次,连续给药5天。建模后连续观察96小时,详细记录各组大鼠活动、睡眠、毛发色泽、摄食量变化及体重变化。造模前2天始每天早9点、下午3点测大鼠体温2次,每只鼠连续测量3次体温,取平均值作为正常大鼠的基础体温,剔除温差大于1℃及单次体温高于℃的大鼠,39筛选出温度符合的大鼠。腹腔注射D-Gal N造模2小时开始每隔2小时测量1次体温,连续记录72h观察各组用药后体温变化,记录各自变化温度值,对退热效果进行对比与评价。⑷生存时间与死亡率:以造模时间为准记录各组大鼠死亡时间与数量,计算死亡率与生存时间。结果:1.一般情况(1)空白组大鼠皮毛光泽度好,活动自如,反应灵敏,进食正常,大小便正常,体重增长正常。(2)模型组大鼠于造模24h后出现进食及活动明显减少,反应迟钝、精神萎靡、嗜睡、毛蓬松、竖立或全身皮毛为汗液浸湿、瘙痒也可呈激惹状态。48h发展至昏睡状态、痛觉反应迟钝或消失、尿深黄、可见四肢或全身抽搐、狂躁、腹腔胀气、口腔四肢末端出血。(3)阳性对照组、给旺-9组大鼠出现上述症状的次数较少,程度较轻,无全身皮毛蓬松汗液浸湿、瘙痒等症状,给旺-9组尿液颜色较模型组浅。2.肝功指标:(1)ALT、含量:与正常组比较,模型组大鼠血清AST ALT、AST值均明显升高(P<0.01,P<0.01)。与模型组比较,蒙药给旺-9低、中剂量组和美能片组ALT含量显著降低,(P<0.05),给旺-9高剂量组亦能降低ALT含量,但尚无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各治疗组均能降低AST水平,但无显著差异(P>0.05)。(2)TBil、D-Bil含量:与正常组比较模型组大鼠血清T-Bil、D-Bil含量升高,差异有统计学意义(P<0.01);给旺-9高、中剂量组大鼠血清T-Bil含量较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);阳性对照组、给旺-9低剂量组大鼠血清T-Bil值较模型组降低,但无统计学意义(P>0.05);给旺-9低、中、高剂量组D-Bil含量与模型组相比,显著下降(P<0.05),阳性对照组血清D-Bil与模型组比较无统计学意义(P>0.05)。(3)TP、ALB、CHE水平:与正常组比较,模型组大鼠血清TP、ALB、CHE均显著降低(P<0.05);与模型组相比给旺-9高、中、低剂量组及阳性对照组ALB、CHE均无显著差异(P>0.05);与模型组比较,给旺-9高、中剂量组大鼠血清TP值升高(P<0.05),阳性对照组大鼠血清CHE显著降低(P<0.05)。3.凝血功能指标:(1)PT:与正常组相比模型组血浆PT延长明显,差异有统计学意义(P<0.01),与模型组比较给旺-9高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠血浆PT无显著缩短(P>0.05)。(2)APTT:与正常组比较模型组血浆APTT值明显延长,(P<0.05)与模型组比较阳性对照组、给旺-9高、中、低剂量组大鼠血浆APTT无显著缩短(P>0.05)。肝组织病理学观察4.⑴肝脏形态学观察:(1)空白组:肝脏色泽红润,大小正常,未见淤血及坏死斑点;(2)模型组:大鼠肝脏色泽变暗,部分区域呈现紫红色,偶见淤血斑,多数肝脏见颜色较浅的大片或斑状坏死;(3)阳性对照组:肝脏色泽较模型组红润,淤血斑点较模型组轻,坏死区域或斑点较少;(4)给旺-9组:肝脏呈红紫色,淤血区域较大,只见点状坏死灶或者坏死斑点;⑵病理学观察:(1)空白组:肝索条排列清晰完整、形态正常,中央静脉为中心呈放射状排列,细胞质丰富,细胞核完整、汇管区无坏死、无炎细胞浸润;(2)模型组:肝细胞结构紊乱、肝细胞肿胀变形,偶可见脂肪变性,汇管区可见不同程度的炎细胞浸润,除此之外可见窦内皮轻到中度增生以及不同程度的胆管增生,汇管区周围细胞弥漫性大片状及桥接样坏死为主,可见弥漫性出血;(3)阳性对照组:肝组织结构紊乱、肝索条不清晰、肝细胞重度水肿较模型组减轻,中性粒细胞及淋巴细胞浸润减少、汇管区及肝叶未见大片状坏死,桥接坏死较模型组减少;(4)给旺-9组:肝板排列,肝索形态未见明显好转、水肿程度无明显改善,高、中剂量组脂肪变性较模型组减轻,汇管区周围炎细胞浸润减轻,高、中低剂量组胆管增生均明显改善,低剂量组肝细胞坏死仍有桥接坏死及碎片状坏死,中、高剂量组坏死区域明显改善以点状坏死和碎片状坏死为主,多见弥漫性出血。(3)肝组织病理评分:与空白组相比模型组病理评分显著升高(P<0.05),与模型组比较给旺-9高、中、低剂量组病理评分数明显减低差异有统计学意义(P<0.05),阳性对照组病理评分显著降低(P>0.05)。5.体温变化:(1)24h内模型组大鼠体温较空白对照组高,给旺-9低剂量组大鼠体温较模型组低,(2)24-8h模型组大鼠体温较空白组低,给旺-9高、中、低剂量组、阳性对照组大鼠体温较模型组低。(3)48-72h模型组大鼠体温逐渐上升,接近空白对照组大鼠体温,给旺-9高、中、低剂量及阳性对照组大鼠体温较模型组低。6.行为学观察:(1)空白组大鼠皮毛光泽度好,活动自如,反应灵敏,进食正常,大小便正常,体重增长正常。(2)模型组12-24h活动次数进一步减少,反应迟钝、精神萎靡、嗜睡、呼吸频率增多;24-48h嗜睡大鼠数增多,毛蓬松、竖立或全身皮毛为汗液浸湿、瘙痒也可呈激惹状态。48h后发展至昏睡状态、痛觉反应迟钝或消失、尿深黄、可见四肢或全身抽搐、狂躁、腹腔胀气、口腔四肢末端出血、鼻溢血到窒息。(3)给旺-9组尿液颜色较模型组浅无明显皮毛蓬松汗液浸湿、瘙痒等症状嗜睡、精神萎靡等较模型组轻,多数大鼠口腔、鼻腔及四肢末端出血导致失血,窒息。(4)阳性对照组大鼠出现上述症状的次数较少,程度较轻,无全身皮毛蓬松汗液浸湿、瘙痒等症状,少数大鼠口腔、鼻腔及四肢末端出血严重者窒息死亡。7.生存时间及死亡率的影响:(1)死亡率:与空白组相比,模型组大鼠死亡率显著增多(P<0.05)给旺-9高、中、低剂量、阳性对照组大鼠死亡率较模型组增多(P>0.05)。(2)生存时间:与空白组相比,模型组生存时间显著减少(P<0.05),与模型组比较,阳性对照组大鼠生存时间延长但无统计学意义(P>0.05),给旺-9高、中低剂量组大鼠生存时间减少,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠行为,饮食量,肝功能指标ALT、AST等变化显著,表明该模型符合蒙医中毒引起的体素相傅,导致毒热增多,肝脏受损出现中毒症状的病理机制。2.给旺-9对D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠皮毛发黄,瘙痒,嗜睡,尿液黄染,粪便干燥等症状有良好的改善作用。3.给旺-9对D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠肝功能转氨酶指标ALT及肝脏代谢功能指标T-Bil、D-Bil的升高有抑制作用,可升高肝脏合成功能指标TP值,防治肝脏功能受损。4.给旺-9对D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠组织病理:肝细胞受损,坏死变性及炎细胞浸润等变化有显著改善作用。5.给旺-9对D-Gal N诱导的急性肝衰竭大鼠反应迟钝,皮毛发黄,嗜睡等症状改善,缓解肝脏代谢功能,防治杆细胞坏死,变性抗炎细胞等作用较阳性对照药强。本研究表明,给旺-9可缓解由D-Gal N引起的肝衰竭大鼠中毒症状,防治肝脏受损及肝功能减退。