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前言 产后出血是我国目前孕产妇死亡的首位原因,其发生率占分娩总数的2~3%,在产后出血中子宫收缩乏力性出血占70~80%。子宫收缩受神经、内分泌、机械性和代谢性等因素的调节。其中内分泌调节倍受关注,多种激素以自分泌和旁分泌形式对子宫活动进行调节,如缩宫素、前列腺素、内皮素等。内皮素是细胞生长和激素代谢的重要调节物质,广泛分布于各种组织内。目前已知,内皮素在调节子宫内膜生长和子宫平滑肌收缩方面具有重要作用,它必须与靶细胞表面的内皮素受体结合后才能发挥作用。本实验采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)检测产妇临产前后子宫平滑肌内皮素受体A的基因表达(ETR_AmRNA),并测定产后2小时内出血量,以探讨临产前后子宫平滑肌ETR_AmRNA含量与产后出血量的关系。 材料与方法 选择在我院行剖宫产手术分娩的产妇60例,根据临床状态分为未临产组(择期剖宫产组)和已临产组(急诊剖宫产组),每组30例。其分组标准如下:(1)未临产组:胎儿监护仪显示无宫缩,肛查宫口未开。(2)已临产组:具体标准按乐杰《妇产科学》第五版。两组产妇均为足月妊娠;无妊高征、多胎妊娠以及内、外科合并征;术前肝肾功能正常;两组产妇手术均采用连续硬膜外麻醉;术前未使用平滑肌松弛剂、前列腺素衍生物及缩宫素;取材后子宫肌立即注射缩宫素10~u,术毕回病房后卡前列甲酯栓1枚肛塞。两组产妇年龄、孕周、产次、血小板及血钙浓度、新生儿体重方面比较均无显著差异h>0.05人每例产妇取新鲜的子宫平滑肌组织标本,即在剖宫产时胎儿娩出后,宫体及全身未用宫缩剂时,无菌切取子宫下段、横切口上缘中段一小条平滑肌约0.5-1.0克。经磷酸盐缓冲液处理后,立即放人液氮中速冻,待转移至实验室时,储存在一70℃超低温冰箱中待测。产后两小时内出血量的测定:每例产妇联合应用羊水红细胞压积测定法、称重法和容积法。子宫平滑肌ETR^rnRNA含量以半定量RT-PCR法检测,RT--PR试剂盒购自TaKaRa公司,ETR3物、内参照GAPDH引物由TaKaRa公司合成。所有资料用Sppslo.0软件包进行统计处理,采用t检验和直线相关分析。 实验结果 已临产组和未临产组产妇子宫平滑肌标本均有ETR^mRN A表达,已临产组 ETR。mRNA表达水平为 0.8259 t 0.04287,未临产组表达水平为0.06867。0.05963,H者相比,已临产组明显高于未临产组,差异显著(P<o.01人已临产组产后出血量为巩.mn.36ml,未临产组为575.40*112.3lrnl,未临产组产后出血量明显高于已临产组,差异显著(P<0.01人未临产组产妇子宫平滑肌ETR^mRNA含量与产后出血量的关系,通过对H者的直线相关分析,得出r=-o.碎1;P<o.01;表明未临产组子宫肌m阻。d巳NA含量与产后出血量呈负相关。已临产组孕妇子宫肌ETR^mRNA含量与产后出血量的关系,通过直线相关分析,得出 r一一0.696;P<o刀h表明已临产组子宫肌ETR。1lllLry A含量与产后出血量呈负相关。 ·2· 讨 论 1.内皮素及其受体的生理作用 内皮素(ET)是一种含有对个氨基酸的多肽家族,最初是从猪主动脉内皮细胞的培养上清液中提取到的,后来在其他组织细胞中又发现两种蛋白肽,粥d命名为ET一*ET-2和ET-3。ET广泛分布于多种组织内,它舢管收缩、细胞增殖以及激素水平的重要调节物质。ET的作用是通过其特异性受体而发挥的,根据与三种不同ET的亲和力,内皮素受体(ETR)可分为两种类型即ETR^和ETR卜ETR在结构上均有7条合20-27个疏水性氨基酸的残基,存在于细胞的膜相区,均需通过G蛋白与磷脂酶C偶联而发挥作用。ETR的组织特异性决定了ET不同的作用,ETR^在血管平滑肌和非血管平滑肌细胞中极为丰富,在诱导血管收缩方面作用显著;而ETR。主要分布在内皮细胞中K少分布于平滑肌细胞中L主要作用为诱导血管舒张、抑制血小板聚集。在特定组织内,ETR。和ETR。的分布也是不同的。如足月妊娠孕妇ETR。主要分布于子宫体,ETR。主要分布于子宫峡部和宫颈,也就是说两种受体在调节子宫功能方面发挥着不同的作用。 2.足月临产前后孕妇子宫平滑肌ETR。mRNA含量的变化 研究发现,在生理状态下,足月妊娠时,胎儿胎盘单位是内皮素浓度最高的部位,主要是ET一八羊水、胎膜、蜕膜和子宫肌层中均含有大量 ET-1,其浓度分别是母血中的 10-40倍。W。ill发现,ET司和 ET-3均能引起子宫平滑肌呈剂量依赖性收缩人T一的作用10倍强于ET-3。多种实验方法证实子宫平滑肌中有ETR^和ETR。两种受体。Bacon CR等研究表明,仅有ETR^而非ETR。介导了ET引起的子宫平滑肌的收缩。 本实验从基因表达水平证实了子宫平滑肌细胞上可局部产生 ·3·h:Fll。受体,表明ET是通过自分泌或旁分泌途径影响子宫肌的活动。结果还表明,已临产组ETR^基因表达明显高于未临产组,差