【摘 要】
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目的:检测三磷酸腺苷(ATP)及P2X7受体拮抗剂KN-62、组织蛋白酶B拮抗剂CA-074Me处理人单核细胞THP-1后P2X7受体、组织蛋白酶B(CTSB)与NALP3的表达,探讨P2X7受体、CTSB及NALP3的相互
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目的:检测三磷酸腺苷(ATP)及P2X7受体拮抗剂KN-62、组织蛋白酶B拮抗剂CA-074Me处理人单核细胞THP-1后P2X7受体、组织蛋白酶B(CTSB)与NALP3的表达,探讨P2X7受体、CTSB及NALP3的相互关系以及P2X7受体影响NALP3表达的可能机制。 方法: (1)常规培养THP-1单核细胞,MTT法检测不同浓度ATP处理后细胞的生长情况,选择模拟炎症状态下细胞反应的最适ATP浓度。 (2)分别用ATP单独处理THP-1细胞, P2X7受体拮抗剂KN-62或CTSB拮抗剂CA-074Me和ATP共同处理单核细胞THP-1,用实时定量PCR、流式细胞术FCM、蛋白印迹法Western blotting分别检测P2X7受体、CTSB、NALP3基因和蛋白表达的变化,探讨P2X7受体影响NALP3表达的可能机制。 结果: (1)ATP作用于THP-1细胞后,细胞的生长受到抑制,模拟炎症状态下细胞反应的最适ATP浓度为2mM。 (2)用ATP处理后,P2X7、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表达均明显高于空白对照组。 (3)用P2X7受体的拮抗剂KN-62和ATP共同处理细胞后,P2X7受体、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表达较ATP组均显著下降,有统计学意义。 (4)用CTSB的拮抗剂CA-074Me和ATP共同处理THP-1细胞后,NALP3及CTSB mRNA及蛋白的表达较ATP组均显著下降,有统计学意义,P2X7 mRNA及蛋白的表达与ATP组相比无显著差异。 结论:在2mM的ATP刺激下,P2X7受体、CTSB、NALP3的表达均明显升高, P2X7的活化引起CTSB、NALP3的表达上调,而抑制P2X7的表达导致CTSB、NALP3的表达减少,说明P2X7受体对CTSB、NALP3炎症小体的表达有影响;抑制CTSB的表达会导致NALP3的表达受到抑制,而对P2X7受体的表达几乎无影响,说明CTSB对NALP3的表达有影响。本研究结果提示P2X7受体可能是通过影响CTSB的表达实现对NALP3炎症小体表达的调控,进而调节炎症反应,P2X7受体和 CTSB可能在炎症反应中扮演重要角色,可为临床炎症反应的预防与治疗提供靶点。
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