金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，简称金葡菌，是一种自然界中广泛存在的革兰阳性致病菌，能够引起心内膜炎、败血症、肺炎和脑膜炎等多种疾病。α-溶血素(alpha hemolysin，Hla)是金葡菌致病的关键毒力因子之一，其相对分子质量为33000。作为穿孔毒素(pore forming toxin，PFT)家族成员之一，Hla蛋白在宿主细胞的膜表面形成七聚体的功能形式，穿透细胞膜继而导致细胞裂解。然而很多研究表明，Hla蛋白亦具有非PFT作用，如通过影响免疫细胞进而影响机体免疫系统，但是具体机制尚不清楚。进一步的研究则表明Hla蛋白与细胞膜表面的ADAM10蛋白结合促进七聚体的形成，同时Hla蛋白通过与ADAM10蛋白相互作用抑制A549细胞中Src激酶的磷酸化水平。　　蛋白激酶Src参与细胞分化、迁移、增殖、存活等多个过程，不仅可影响下游信号的级联反应，也参与了B细胞受体(B cell receptor, BCR)信号转导过程。BCR介导的信号通路对B细胞发育、抗体产生等过程至关重要。　　本研究的第一部分为金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体蛋白的表达纯化及中和性抗体的制备。具体内容有:　　1.Hla蛋白的表达纯化及活性验证。通过构建Hla蛋白的表达载体，利用原核表达系统大肠杆菌重组表达Hla蛋白。通过红细胞裂解实验测定Hla蛋白的溶血活性，验证其对不同种属红细胞的裂解作用的差异。　　2.Hla蛋白的突变体蛋白HlaH35L的表达纯化及活性验证。通过重叠PCR方法将Hla蛋白除信号肽之外的第35个氨基酸组氨酸(H)替换为亮氨酸(L)，并测定突变体蛋白的溶血活性，结果发现与文献报道一致，其不能够裂解兔红细胞。　　3.Hla蛋白中和性抗体的制备。制备并纯化Hla蛋白的特异性多克隆抗体，溶血活性检测结果显示Hla蛋白的多克隆抗体能够抑制Hla蛋白介导的兔红细胞裂解作用，表明该抗体具有良好的中和活性。　　本文的第二部分为Hla蛋白抑制BCR信号通路机制的初步研究。具体内容如下:　　1.Hla蛋白可与小鼠B细胞系WEHI-231特异性结合。通过流式细胞术和免疫荧光实验证实Hla蛋白可与WEHI-231细胞特异性结合。细胞转染实验则证实该结合部分依赖于Hla蛋白受体ADAM10。同时证实突变体蛋白HlaH35L与Hla蛋白具有一致的结合活性。　　2.Hla蛋白抑制BCR信号通路机制的初步研究。CCK-8实验结果发现Hla蛋白可以抑制anti-IgM所诱导的WEHI-231细胞凋亡。Western Blotting结果则表明，与A549细胞不同，Hla蛋白及突变体蛋白都能够诱导WEHI-231细胞Src的磷酸化，BCR通路活化则导致Src磷酸化程度降低，Hla蛋白可通过诱导Src的磷酸化继而影响BCR信号通路。综上所述，我们成功获得了纯度较高的金葡菌重组Hla蛋白及其突变体HlaH35L蛋白，制备并纯化了具有良好中和活性的Hla蛋白的特异性多克隆抗体。进一步我们发现，Hla蛋白及突变体蛋白都能够通过结合ADAM10诱导蛋白激酶Src的磷酸化影响BCR通路。我们的研究结果提示除了作为穿孔毒素，Hla蛋白还可以通过诱导Src的磷酸化影响BCR通路，且该过程不依赖于七聚体这样的功能形式。