X线照射对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的作用及机制研究

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研究目的:研究脊髓损伤后神经功能变化的病理过程,探讨X线照射对脊髓损伤后神经功能恢复的作用及抑制胶质瘢痕和炎症形成的分子机制。研究方法:采用简单随机化的方法将75只雌性的SD大鼠分成假手术(Sham)组、脊髓损伤(SCI)组、SCI+2Gy照射治疗组、SCI+10Gy照射治疗组、SCI+20Gy照射治疗组,每组各15只。采用自制改良型Allen打击法建立大鼠脊髓损伤模型,术后2小时分别进行单次不同剂量X线照射治疗。在术前及术后第1天、3天、5天、7天和14天通过BBB评分和斜板试验对大鼠进行运动功能评估。在术后第14天处死所有大鼠,采集损伤处脊髓样本。采用HE染色测定大鼠脊髓损伤后受损部位中空腔病变的情况;采用Nissl染色测定大鼠脊髓损伤受损部位中神经元的情况;采用免疫组织化学和Western bolt实验测定损伤脊髓中NeuN和MBP蛋白的表达情况以评估神经元细胞和髓鞘的情况;免疫组织化学和Western bolt实验测定受损脊髓部位中胶质瘢痕蛋白(GFAP、Vimentin)、炎症因子(TNF-α、IL-1 β)和信号通路(p38、p-p38、Akt、p-Akt)的表达情况。实验结果:采用自制改良型Allen打击法能成功制成大鼠脊髓损伤模型,期间死亡11只(SCI组3只,SCI+2Gy照射治疗组3只、SCI+10Gy照射治疗组2只、SCI+20Gy照射治疗组3只),后续进行补充实验大鼠,使每组样本量达到15只。BBB评分和斜板试验的结果显示:X线照射治疗能改善大鼠脊髓损伤后的运动功能。不同剂量的X线照射治疗效果各有差异,其中SCI+10Gy照射治疗组的治疗效果最好。HE染色结果显示:X线照射减少受损脊髓中空腔病变率。Nissl染色的结果显示:X线照射减少受损脊髓中尼氏小体的损失。免疫组织化学和Western bolt的实验测得:X线照射抑制受损脊髓中NeuN、MBP表达的减少,X线照射减少受损脊髓中神经元细胞和髓鞘的损失;X线照射减少受损脊髓中胶质瘢痕蛋白(GFAP、Vimentin)和炎症因子(TNF-α、IL-1β)的表达,胶质瘢痕和炎症的形成与继发性脊髓损伤有关;X线照射减少受损脊髓中p-p38和p-Akt的表达,大鼠脊髓损伤后损伤脊髓中激活的p38 MAPK和Akt信号通路被X线照射抑制。结论:X线照射通过抑制胶质瘢痕和炎症的形成对脊髓损伤的修复过程发挥积极的治疗作用,这可能与抑制p38MAPK和Akt信号通路激活有关。
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