葡萄灰霉菌产孢类群划分及其生物防治研究

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宁夏贺兰山东麓地区是我国最佳的酿酒葡萄栽培生态区,截止2017年葡萄栽培面积已达到4.3万hm2。随着葡萄栽培年限和栽培面积的不断扩大,葡萄病害的发生也日益严重,尤其是葡萄开花和成熟期间由灰葡萄孢Botrytis cinerea引起的葡萄灰霉病危害严重。灰葡萄孢B.cinerea为复合种,其生物学特性、致病性和抗药性均存在较大差异,这对于葡萄灰霉病的高效防治带来了巨大的挑战。目前有关葡萄灰霉菌产孢类群划分报道较少,明确葡萄灰霉病菌的致病性和抗药性变异具有重要的意义。长期以来葡萄灰霉病的防治过度依赖化学农药防治,这对果品和生态安全造成巨大冲击,因此开展葡萄灰霉病的生物防治是解决问题的关键。本研究以从贺兰山东麓地区不同葡萄品种上分离的葡萄灰霉病菌为研究对象,利用形态学和分子生物学手段对葡萄灰霉病菌产孢类群进行鉴定与划分;探究6种市售生防药剂和2株拮抗内生真菌对葡萄灰霉病的防治作用,以期为贺兰山东麓绿色(有机)葡萄生产提供理论依据。结果如下:1.通过培养性状比较、菌核及分生孢子形态特征和致病性之间的差异分析,结合分子生物学手段对分离纯化的18株葡萄灰霉菌菌株产孢类群进行鉴定和划分,结果表明:18株葡萄灰霉菌菌株依据培养性状、菌核及分生孢子形态特征和致病强弱之间的差异可划分为6个产孢类群;扩增6个产孢类群中的6株代表菌株Bc-729基因,证明6株菌株均为灰葡萄孢属;扩增Bc-hch基因,构建系统发育树分析认为6株代表菌株在0.001比例尺下划分为6个分支,6株代表菌株间在碱基序列上存在5~10个碱基的差异。2.为了考察6种生物防治药剂对葡萄灰霉病的防治效果,通过室内毒力测定、离体果粒和田间防效试验,结果表明:植物源药剂丁子·香芹酚和微生物源药剂寡雄腐霉菌均能有效抑制葡萄灰霉病菌菌丝的生长,其EC50分别为4.64 μL/mL和1.21 mg/mL;在离体果粒和田间药效试验中,120μL/mL 丁子·香芹酚和1.8 mg/mL寡雄腐霉菌对葡萄灰霉病都具有很好的预防和治疗作用,其防治效果与化学农药0.2 μL/mL嘧啶胺相当。3.为明确2株植物内生拮抗真菌XKZKDF27和NQ8GII4对葡萄灰霉菌的防治作用,通过皿内平板对峙、离体果粒和成熟期田间灰霉病的防效试验,结果表明:内生拮抗真菌XKZKDF27和NQ8GII4都能够很好的抑制葡萄灰霉菌菌丝的生长,抑制率均在60%以上;2菌株发酵滤液对葡萄离体果粒具有较好的预防保护作用,对成熟期葡萄灰霉病的田间防效分别为70.29%和67.32%,显著高于市售生防农药的防治效果,与化学药剂腐霉利防效相当。
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