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目的:睑板腺功能障碍(Meibomian gland dysfunction,MGD)尚无有效的药物治疗方法,通过优化大鼠睑板腺祖细胞(progenitor cells of Meibomian gland)的培养方法,研究睑板腺祖细胞体外克隆培养、扩增、分化的特点及表型,可提供一种有效的体外药物筛选工具。方法:从8周龄大鼠的眼睑中分离出睑板腺,通过酶消化法将其消化成为睑板腺单个细胞,与丝裂霉素处理过的3T3-L1细胞混合均匀后接种,用上皮培养基(supplemental hormonal epithelial medium,SHEM)进行克隆培养,在培养基中加入Y27632以增加克隆形成率,待克隆形成至一定程度,即用实时定量PCR(Quantitative real-timePCR,qRT-PCR)和免疫荧光染色的方法分析睑板腺祖细胞体内与体外的特异性标志物,用油红染色观察的脂质合成情况。结果:睑板腺祖细胞的克隆约在3-4天出现,第7-8天左右大部分克隆相互融合,加入Y27632可明显增加睑板腺祖细胞的克隆形成率。qRT-PCR结果显示干细胞相关性特异性标志物p63、Krt15、Sox9,角蛋白标志物Krt5、Krt14、Krt10在睑板腺祖细胞体内和体外培养条件下均有不同程度的表达,且在体外扩增时中表达量较高。脂质代谢及细胞分化相关的基因SCD1、Acat1、Awat1、Hmgcs1、Far1、Elov14和PPAR-γ的表达水平在克隆培养的细胞中均显示下调。免疫荧光显示,Krt14在睑板腺组织及体外细胞培养时内均有表达,p63则表达于在睑板腺组织基底层细胞与体外扩增祖细胞的的细胞核中,而Sox9随机出现在睑板腺组织和其祖细胞克隆中,干细胞niche相关蛋白Tenascin-C(TNC)表达于腺泡基底层周围,Krt10出现在复层化的克隆细胞中。油红染色显示睑板腺祖细胞原代培养条件下几乎无脂质的积累。结论:睑板腺祖细胞在体外培养、扩增时具有干细胞的一些特点且与睑板腺基底层细胞的表型有一定的相似性,其细胞克隆中还存在向能睑板腺腺泡和腺管两种类型细胞分化的细胞,故这种扩增及分化方法可以用于研究睑板腺祖细胞的生物学特性,克隆培养的睑板腺祖细胞有可能用于筛选MGD的治疗性药物。