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[目的]1.通过高糖、高脂饲料,饲养大鼠,结合腹腔注射:链脲菌素(streptozotocin STZ),对大鼠血糖、血脂、肝脏相关转氨酶、肝脏形态、结构、功能进行检测,验证糖尿病肝损伤大鼠的模型是否能够成功建立。通过观察电针"胰俞’"、电针"非穴’"、"格列美脲给药"对糖尿病肝损伤大鼠血糖、血脂、体重、肝脏相关转氨酶、以及肝脏形态、结构、功能的影响;并进行三种干预方式对比,初步判断,电针"胰俞"穴是否对糖尿病大鼠肝脏具有保护作用。2.检测糖尿病大鼠肝脏中胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1;GLP-1)蛋白表达位置,以及对比空白组与模型组基因和蛋白表达量的差异,各组干预后表达量的差异,检测电针"胰俞"穴是否能增加肝脏GLP-1基因及蛋白表达,探讨电针"胰俞"穴是否能够对糖尿病肝损伤具有保护作用。[方法]实验动物40只雄性大鼠,适应性饲养1周后,随机取8只为空白组,给予普通饲料喂养。其余32只大鼠作为造模组,以高糖高脂饲料喂养50d后,一次性腹腔注射STZ溶液72h后测随机血糖,成模标准:随机血糖≥16.7mmol/L。动物分为空白组、模型组、电针"胰俞"组、电针"非穴’"组、"格列美脲药物"组,所有动物8只/笼饲养。其中,空白组于适应性饲养1周结束后机抽取,其余动物于适应性饲养后经造模并评估成模后,随机抽取。各组干预均为1次/d,6d/周,共4周。电针参数:连续波,5Hz,3-5mA,20min。将所有动物,在干预每隔一周时,对大鼠进行尾部取血,检测大鼠空腹血糖、体重。末次干预结束后测定血脂,转氨酶:丙氨酸转氨酶(alanine transaminase;ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartatetransaminase;AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase;GGT)。并对肝脏进行HE染色观察肝细胞形态变化。以实时聚合酶链反应(Real-time PCR;RT-PCR)法检测肝脏GLP-1基因表达,以蛋白质印迹法(Western blot;West-ern)检测大鼠肝脏中GLP-1蛋白水平。[结果]实验1显示:采取高糖、高脂饲料饮食,结合了 STZ溶液腹腔注射,创建2型糖尿病(type2diabetesmellitus;T2DM)大鼠模型,成模标准:随机血糖多16.7mmol/L。统计学显示,各时间点模型组血糖,均高于空白组(P<0.05),差异有统计学意义;模型组大鼠的总胆固醇(total cholesterol;TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol;LDL-C)、甘油三酯(triglyce:ride;TG)水平均显著高于空白组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterin;HDL-C)显著低于空白组(P<0.05),差异有统计学意义;模型组大鼠的AST、ALT、GGT水平均显著高于空白组(P<0.05),差异有统计学意义;且HE染色肝组织切片可见:肝细胞显示广泛肿胀,窦间隙明显变窄,出现炎细胞浸润以及纤维组织增生,可见,大鼠的肝脏出现了明显的损伤现象。电针胰俞穴,可快速调节2型糖尿病大鼠升高的血糖,其长期疗效也较为可靠,且优于电针非穴组。同时,电针胰俞穴,也可快速抑制2型糖尿病大鼠体重下降,但随着病程的进展,其调节体重的作用并不显著。然而,对于血脂的各项指标所言,电针胰俞穴,可有效的降低2型糖尿病大鼠所升高的TC、TG、LDL-C水平,且在调节TG、LDL-C上,优于格列美脲灌胃;而在调节TC、LDL-C上,优于电针非穴。此外,电针胰俞穴,可有效降低2型糖尿病大鼠血清中升高的AST、ALT、GGT水平,且其作用优于电针非穴。电针胰俞穴,可有效降低2型糖尿病大鼠血清中升高的AST、ALT、GGT水平,且其作用优于电针非穴。肝脏病理切片:电针胰俞穴,能够有效的降低肝细胞胞质红染,核固缩,细胞凋亡,炎症细胞浸润,小胆管增生,小泡性脂滴的现象,改善脂质代谢紊乱,且改善效果,优于电针非穴组和格列美脲组,电针非穴组和格列美脲组,均能很好的改善炎症细胞浸润和小胆管增生,而格列美脲改善小泡性脂滴现象,优于电针非穴组。实验2显示:1.在大鼠肝脏中显示存在GLP-1受体蛋白的表达,并在53kD处出现明显蛋白条带,与其他实验证明相同。对肝脏GLP-1受体蛋白进行灰度值检测,统计学分析后,各组之间具有可比性(P<0.05),以空白组为标准对象,模型组、胰俞组、格列美脲组、非穴组的GLP-1受体蛋白灰度值,均呈下降状态(p<0.05);与模型组比较,胰俞组、格列美脲组、非穴组依然呈显著上升状态(P<0.05);与胰俞组比较,格列美脲组与非穴组GLP-1受体蛋白灰度值,差异无统计学意义,虽然全部低于胰俞组,但均无显著性差异;与格列美脲组比较,非穴组GLP-1受体蛋白灰度值,高于格列美脲组,并与胰俞组基本一致。2.在基因层面表达中,与空白组相比较,模型组、胰俞组、非穴组、格列美脲组的基因表达量均呈显著下降状态,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组相比较,胰俞组基因表达量显著升高(P<0.05),格列美脲组与非穴组也均有升高,但无统计学意义;与胰俞穴相比,格列美脲组与非穴组均降低,其中非穴组与之有统计学意义(P<0.05);格列美脲组与非穴组基本一致。[结论]提示:通过高糖、高脂饲料饮食,结合STZ溶液腹腔注射,验证了糖尿病肝损伤大鼠的模型成功建立,符合相关文献报道,可完成后续实验部分。电针胰俞穴,能够有效的调节2型糖尿病大鼠血糖,在短期内抑制糖尿病患者的体重下降,显著降低TC、TG、LDL-C水平,并且有效改善了脂质代谢紊乱,并进一步保护了肝细胞。电针"胰俞"穴,可以有效的增加GLP-1受体蛋白及基因表达。保护肝脏可能是通过降低血糖、血脂、改善糖脂代谢紊乱,产生的作用,从而增加GLP-1受体蛋白和基因表达,最终改善糖尿病肝损伤。