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1.目的脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)大多由外伤引起,是一种严重的中枢神经系统疾病,在当今社会上呈现高发病率、高致残率、高耗费率趋势,给患者以及社会带来了沉重的负担。脊髓损伤后所引起的瘫痪难以恢复的主要原因是脊髓损伤后一系列的病理损害,包括局部出血、水肿、神经元细胞坏死以及神经元细胞坏死后所导致的细胞分化和再生困难等。随着对中枢神经系统的深入研究,通过文献的梳理,我们发现脉冲电针在治疗脊髓损伤后神经功能的修复方面有一定的优势,而且治疗效果也得到了肯定。本课题组的前期实验也证明,脉冲电针疗法可以促进神经细胞修复再生,有效地促进脊髓损伤后神经功能的恢复。本研究以与神经干细胞分化发育密切相关的碱性螺旋-环-螺旋(basichelix-loop-helix,bHLH)转录因子家族信号途径为切入点,以脉冲电针为干预手段,观察脉冲电针对脊髓损伤后大鼠行为学、病理学以及Mash1、NeuroD2表达情况的影响,探讨脉冲电针对调节脊髓损伤后神经干细胞增殖分化的作用机理,为临床应用脉冲电针治疗脊髓损伤提供科学的实验依据。2.方法本研究采用动物实验方法,利用改良式Allen’ s打击法复制脊髓损伤动物模型。选择雄性清洁级SD大鼠100只,随机分为空白对照组(20只)、空白电针组(20只)、假手术组(20只)、模型组(20只)和脉冲电针组(20只)五组,其中模型组和脉冲电针组采用改良式Allen’s打击法复制脊髓损伤大鼠模型,空白对照组和空白电针组不造模,假手术组只暴露硬脊膜,不进行打击损伤,之后空白电针组和脉冲电针组选取"大椎"、"命门"二穴进行脉冲电针干预,时间为20min,每天1次,连续干预28d,此时空白对照组、假手术组和模型组给予相同时间、相同强度的抓取、固定,以保证相同的处理条件,但不进行脉冲电针治疗。在连续干预28d后,采用BBB评分法对大鼠进行运动功能评分,评定脉冲电针对大鼠神经功能恢复的影响;采用HE染色法观察各组大鼠损伤脊髓部位的病理改变,评定脉冲电针对大鼠损伤脊髓部位病理改变的影响;运用免疫组织化学技术和Western Blot技术观测大鼠损伤脊髓部位Mash1、NeuroD2的表达情况,综合评定脉冲电针对大鼠损伤脊髓修复的影响。3.结果BBB 评分结果显示,空白对照组、空白电针组和假手术组的BBB评分比较无差异,都为满分21分,与空白对照组比较,模型组与脉冲电针组BBB分值明显降低,具有显著统计学差异(P<0.01),与模型组比较,脉冲电针组BBB分值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);HE染色结果显示,空白对照组、空白电针组和假手术组的脊髓组织结构致密,灰质呈蝴蝶状、细胞形态规则,胞体内细胞核大而圆,核仁清晰,白质排列致密、与灰质间界限清晰,模型组灰质与白质界限隐约可见,神经元细胞水肿明显、排列疏松,有大量的炎性细胞浸润及瘢痕形成,脉冲电针组灰质与白质界限较清晰,神经元形态较好,排列较整齐,核仁较清晰,炎性细胞及胶质瘢痕明显减少;免疫组化及WestemBlot结果显示,空白对照组、空白电针组和假手术组的Mash1、NeuroD2表达没有显著差异,与空白对照组比较,模型组和脉冲电针组大鼠脊髓组织受损局部Mash1、NeuroD2的表达都显著升高,有显著性差异(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,脉冲电针组大鼠脊髓组织损伤部位Mash1、NeuroD2的表达都显著升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。4.结论利用改良式Allen’s打击法能较好地复制脊髓损伤大鼠模型,脉冲电针能改善脊髓损伤大鼠下肢的运动功能,可以明显减少脊髓损伤后大鼠损伤部位炎性细胞的浸润和胶质瘢痕的形成,这可能与诱导Mash1、NeuroD2蛋白的表达,促进脊髓损伤后神经修复再生有关。