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肺癌是最常见的也是死亡率最高的恶性肿瘤之一。据世界医疗肿瘤防治机构不完全统计:5年总生存率仍低于15%,非小细胞肺癌是其中主要亚型,包括肺腺癌及鳞癌等。基于分子标记物检测为导向的精准靶向及免疫治疗能明显降低病患的死亡率。一些小分子标记物能够作为预后预测因子。使得小分子标记物领域成为近年来的肺癌研究热点和前沿阵地。近年来的研究表明,非编码RNA在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的调控作用。具有作为一种在非小细胞肺癌的诊断和治疗及预后预测因子的潜力。本研究通过共享GEO数据库的基因芯片数据,采用生物信息学方法重新注释基因芯片探针,然后通过计算获得探针对应的lncRNA表达量的统计数据。分析发现存在29种差异表达的lncRNA,进一步针对5个GSE数据集分析发现在肺腺癌与癌旁组织中具有显著差异表达的lncRNA,并比较分析肺腺癌与鳞癌两类别的GSE数据集,通过不同统计分析方法取交集,发现非小细胞肺癌与癌旁组织中差异较为显著的lncRNA,本研究选择了其中的lncRNA LOC285194作为研究目标,LOC285194也被称为反义RNA LSAMP3,是一个位于3q13.31的位点,长约2kb的长非编码链RNA。LOC285194最早被证明在骨肉瘤是肿瘤抑制单元。本研究前期预实验选择了非小细胞肺癌(NSCLC)10对癌及癌旁组织样本检测LOC285194的表达水平。实验发现癌旁组织中LOC285194的表达水平要显著高于癌组织的表达水平,(*P<0.05)。之后分别测NSCLC患者的肺癌细胞株(A549、NCI-H460、Calu-3、NCI-H1299和PC-9)及正常人的支气管上皮细胞株(16HBE)的LOC285194表达水平,结果显示实验组NSCLC的癌细胞组织表达量明显低于对照组16HBE组织。显示LOC285194在非小细胞肺癌细胞株及正常支气管上皮细胞株中的表达有显著差异(***P<0.001)。我们通过siRNA基因沉默技术确定功能的LOC285194-siRNA功能序列后,按照功能敲减序列构建LOC285194-shRNA-A549细胞株(慢病毒感染的发卡RNA干扰敲减LOC285194的A549细胞系),研究敲减细胞系机制功能以及裸鼠瘤活体实验模型。检测经基因敲减技术处理的肺癌细胞系LOC285194-shRNA-A549的LOC285194的表达量,发现较转染空质粒对照组明显下调。通过MTT试验及细胞迁移功能试验发现:基因敲减技术处理的细胞株LOC285194-shRNA-A549,无论在细胞增殖还是迁移能力均明显增强。证实经基因敲减技术处理的肺癌细胞系,下调LOC285194的表达量后,肿瘤细胞的增殖迁移能力增强。在裸鼠体内的细胞移植瘤动物实验中,筛选出可以稳定遗传的LOC285194-shRNA-A549细胞核对照组进行小鼠成瘤试验。实验分为三组,分别将A549细胞株、空白对照、LOC285194-shRNA-A549细胞株注入裸鼠体内,结果可得成瘤组有LOC285194-shRNA组和空白对照组,两组相比则LOC285194-shRNA成瘤时间更短,统计学有显著差异(*P<0.05)。暗示针对LOC285194的基因沉默/敲减技术处理的肺癌细胞株,随着LOC285194被下调,控制肿瘤的增殖或生长的能力减弱,反证LOC285194在动物体内是一个抑制肿瘤单元,验证了 LOC285194在活体对移植瘤的抑制功能。为了进一步了解LOC285194在非小细胞肺癌现实病案中对预后的提示意义。对56例NSCLC患者的癌组织及其癌旁组织56例均进行实时荧光定量PCR仪测LOC285194RNA的表达情况,研究发现:在全部56对非小细胞肺癌组织中,相对癌旁组织低表达为100%。根据LOC285194表达水平的中位值将56对样本分为低表达组和高表达组。结合临床病案随访数据,将两组进行生存曲线分析,COX分析以及X方检验分析。结果发现:在真实临床病案中通过生存分析及其与临床病理特征的关系,高表达组的PFS及OS均好于低表达组。并且发现LOC285194的表达水平与患者的T分期明显相关,与组织类型、性别、年龄、临床分期等临床病例特征没有相关性。在NSCLC患者中,LOC285194高表达组的五年生存率明显高于LOC285194低表达组,可见LOC285194的表达量是NSCLC患者的预后相关因子。这表明LOC285194可能与肺癌细胞功能以及预后有重要关系。目前尚不清楚LOC285194可能导致与人类癌症有关任何独特的特性与分子机理,更深入的研究仍然有重要意义。本文通过前期的GEO数据库芯片分析结合文献分析发现:LOC285194与肿瘤抑制基因p53的通路有关,研究对LOC285194作为抑制肿瘤单元的功能机制进行实验发现,通过LOC285194 RNA Pull-down分析表明捕获下来的lncRNA-蛋白复合体中具有与P53分子量大小的条带。WB实验检测到P53蛋白的存在。进一步通过P53的抗体进行RNA免疫共沉淀捕获lncRNA-蛋白复合体后通过qPCR检测LOC285194分子发现,P53蛋白结合在LOC285194的30端的结构区域,研究确定LncRNA-LOC285194与P53在非小细胞肺癌中相互结合互作,暗示LOC285194在非小细胞肺癌中与P53通路有关,其高表达可以激活P53相关通路,而行使其抑制肺癌细胞增殖迁移的生物学特性。临床病例分析表明LOC285194在非小细胞肺癌中是一种抑癌单元和独立的预后因子;在转化医学中,如何根据其抑癌机理,开发RNA-靶向药物,寻找针对LOC285194过表达的转化医学方法具有十分重要的意义。