两种氧化酶的固定化及其生物传感器性能研究

来源 :南京林业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:devil521zhou
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本文对葡萄糖氧化酶(GOD)和L-谷氨酸氧化酶(L-GOX)的膜固定化进行了研究,通过对固定化载体和固定化条件的优化,得到了各自固定化的最优条件,并且以此固定化酶膜为元件构建生物传感器,对传感器的性能进行了考察。以戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,对葡萄糖氧化酶进行了固定化研究,分别考察了载体材料、载体孔径、酶浓度、BSA浓度和戊二醛浓度对固定化的影响,得到最佳固定化条件为:孔径为0.45μm的混合纤维素微孔滤膜为固定化载体,0.4%(v/v)的戊二醛为交联剂,3%(w/v)的BSA为保护剂,葡萄糖氧化酶浓度为3.75mg/mL时,制备的固定化葡萄糖氧化酶活力最高。固定化酶的最适催化温度为40℃,最适催化pH为7.0,米氏常数Km=20.317mmol/L,最大反应速度Vmax=0.1176mmol/(L·min)。L-谷氨酸氧化酶最佳固定化条件为:载体为孔径0.45μm的混合纤维素微孔滤膜,酶浓度、BSA浓度和戊二醛浓度分别为8mg/mL、1%(w/v)和0.3%(v/v),以此条件制备的固定化L-谷氨酸氧化酶活力最高,其最适催化温度为65~70℃,最适催化pH为7.0左右,米氏常数Km=1.063mmol/L,最大反应速度Vmax=0.557mmol/(L·min)。以固定化葡萄糖氧化酶构建的葡萄糖传感器响应时间小于20s,葡萄糖浓度在0~150mg/dL之间有良好的线性关系,同时,该传感器有很好的稳定性和抗干扰能力。以固定化L-谷氨酸氧化酶构建的L-谷氨酸传感器响应时间小于20s,L-谷氨酸浓度在0~160mg/dL时,该传感器测定的线性关系为Y=0.9715X+0.9966(R~2=0.9994),同时,该传感器有很好的抗干扰性和稳定性。
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