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甘草中的主要有效成分为皂苷类和黄酮类,而以往人们仅对甘草中皂苷类成分作了大量深入的研究,评价甘草的质量也仅以甘草酸的含量作为其质量优劣的标准,显然不够全面。同时,随着药理学的深入研究,表明甘草黄酮类成分是甘草的一类主要活性成分,具有抗炎、抗HIV、抗肿瘤等多种药理作用和广阔的开发及应用前景,已成为当前中药甘草研究的热点。本文结合05年版药典任务—对甘草中黄酮类成分进行研究及其含量测定,为建立甘草黄酮类成分的质量标准提供理论依据。 全文由以下五部分组成: (一) 综述 对甘草黄酮类成分的研究进展及中药质量标准研究状况进行了综述。 (二) 甘草黄酮类成分的提取与分离 将甘草药材粉末用水煮醇沉法提取,再依次将甘草水溶液用乙酸乙酯和正丁醇溶剂萃取,乙酸乙酯层提取液分别经硅胶柱和聚酰胺柱层析分离后,均可得到同一单体化合物。经化学方法和光谱解析鉴定为已知成分甘草苷,为甘草黄酮类的一个主要成分。结果表明,采用硅胶柱层析分离比聚酰胺柱层析较易获得甘草苷;采用样品系陕西合阳县所产,其甘草苷的含量较高。 (三) 2005年版中国药典甘草含量测定项标准修订 结合2005年版中国药典甘草含量测定项标准修订任务。选用超声法处理样品,应用高效液相色谱法,以乙睛-0.5%醋酸(1:4)为流动相,检测波长为276nm,对24份甘草样品中甘草苷含量进行了测定。结果表明甘草苷含量最高可达3.72%,最低为0.86%,其平均含量达1%以上,所以规定甘草中甘草苷的含量限度不低于1.0%。该方法线性关系良好(r=0.9998),最小检出限为0.1μg·mL-1,回收率在97.66%~103.5%之间,该方法具有操作简便、快速,准确等优点,并就此拟定了2005年版药典甘草含量测定项正文(草案)。 (四) 紫外分光光度法测定甘草中总黄酮的含量 利用二氢黄酮类化合物在碱性条件下转化为查尔酮类的特性,以甘草苷为对照品,10%KOH溶液作为显色剂,在波长400nm处进行测定,建立了测定甘草中总黄酮含量的紫外分光光度法,并应用该方法对46份甘草样品中的总黄酮含量进行了测定。表明该方法的线性关系良好(件0.9992),回收率在95.0%一100.5%之间,46份甘草样品的总黄酮平均含量为4.37%。该法与通常测定方法相比,具有操作简便,准确度高,重现性好等优点。 (五)甘草黄酮类成分的指纹图谱研究采用HPLC方法,选用70%乙醇超声提取、乙酸乙酷萃取法处理样品,以乙睛一0.2%醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为310nm。在选定的色谱条件下,考察了10批不同产地的甘草药材,标示出n个色谱峰作为甘草黄酮类成分指纹图谱的共有特征峰,并使用几种不同的相似度计算软件对结果进行评价。结果表明不同产地的甘草药材其化学成分存在差异,但各共有峰均存在,相似度在0.78卜0.931之间。通过建立甘草黄酮类成分的指纹图谱,可有效地鉴别甘草药材真伪,为全面评价及控制甘草内在质量提供新的方法和理论依据。