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目的:白细胞介素35(Interleukin-35,IL-35)是新发现的IL-12(Interleukin-12)家族成员,由EBI3和P35组成的异源二聚体。IL-35在肝癌、胰腺癌等多种肿瘤中高表达并参与肿瘤的发生发展与转移,但在非小细胞肺癌(NSCLC)中的研究少见报道。本研究通过检测IL-35在NSCLC组织和细胞中的表达水平,研究IL-35在肺癌细胞中的生物学功能和作用机制。方法:1.收集74例NSCLC组织石蜡标本和25例肺部良性病变组织石蜡标本进行连续切片,对IL-35的两个亚基EBI3和P35采用免疫组织化学法染色,分析两个亚基的表达水平及其相关性。收集这些病例数据以分析IL-35表达与NSCLC的临床病理学特征之间的相关性。2.收集21例非小细胞肺癌患者和11例健康体检者的外周血,ELISA法检测静脉血清中IL-35的表达水平。3.采用实时荧光定量PCR法(q PCR)和ELISA法检测肺癌细胞系A549,NCI-H1975,PC-9和人正常HEK293中IL-35的分泌水平。4.人重组蛋白IL-35外源性刺激A549和NCI-H1975细胞,运用CCK-8实验、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验来检测肺癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力;q PCR检测增殖与凋亡相关分子的表达情况。结果:1.免疫组化连续切片染色,结果显示NSCLC组织中IL-35亚单位EBI3和P35的表达水平显著高于肺部良性病变组织,且EBI3和P35在空间分布和表达水平上有很强的相关性(P<0.001)。将EBI3和P35同时高表达定义为IL-35表达,分析发现IL-35表达有42例,占56.8%。且IL-35的表达与肿瘤T分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与患者性别、年龄、组织学类型、分化程度、远端转移等无相关性(P>0.05),提示IL-35可能是NSCLC的潜在标志物。2.ELISA结果显示NSCLC患者血清中IL-35含量为(464.64±352.88)pg/ml,明显高于健康体检者(27.15±16.50)pg/ml(P<0.001)。3.q PCR结果显示IL-35亚基及其受体在3种肺癌细胞系中均有不同程度的表达。ELISA结果发现肺癌细胞株分泌IL-35的水平明显高于正常上皮细胞(P<0.05)。4.IL-35作用于A549和H1975细胞,能明显促进肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞凋亡,同时肺癌细胞的迁移与侵袭能力增强。q PCR证实促增殖分子Cyclin D1和抗凋亡分子Bcl-2的m RNA表达水平显著上调,促凋亡分子Fas的m RNA表达水平下调(P<0.05,图7),而抑癌基因P53的表达未见明显差异。结论:IL-35在NSCLC组织、外周血及细胞中均高表达,并可促进肺癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡。IL-35可能通过调节细胞增殖凋亡相关分子的表达水平来发挥促癌作用。