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背景与研究目的卵巢癌是是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的肿瘤，寻找有效的治疗方法一直是临床的迫切要求。在卵巢癌的治疗中，基因治疗治疗已成为手术、化疗、放疗三大治疗外新的治疗手段。自噬在清除损伤或多余的细胞器，维持细胞内稳定方面起重要作用。自噬可清除损伤的细胞器，避免如自由基等有基因毒性的物质的产生，从而使突变率降低，抑制肿瘤的形成，而自噬的缺陷可导致肿瘤的发生。Beclin1基因是第一个确认的哺乳动物的自噬基因，也是第一个确认的在自噬的溶酶体降解途径中起肿瘤抑制的基因，对自噬体的形成至关重要。有研究报道乳腺癌中Beclin1的表达下调，Beclin1缺陷明显增加肝癌、肺癌和淋巴瘤的发生率，但自噬基因Beclin1与卵巢癌的关系尚不清楚。P13K／PKB是目前涉及凋亡调控较清楚的细胞信号传导途径，有研究表明其亦是调控自噬的主要途径之一，ClassⅠP13K抑制自噬，而ClassⅢP13K刺激自噬的发生。本研究通过检测上皮性卵巢癌组织中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径P13K／PKB中的成分ClassⅠP13K (p110α)、ClassⅢ P13K(hvps34)及其下游的磷酸化PKB(p-PKB)的表达变化，探讨自噬基因Beclin1及其调控相关信号传导途径P13K／PKB中的成分p110α、hvps34、p-PKB的表达与上皮性卵巢癌的发生发展之间的关系；研究自噬基因Beclin1在SKOV3细胞中过表达对肿瘤细胞在体内、体外增殖的影响及其相关调控信号途径P13K／PKB的变化，探讨自噬基因Beclin1表达载体作为卵巢癌基因治疗的可行性。方法1.用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin1、ClassⅠP13K(p110α)、ClassⅢP13K(hvps34)及其下游的磷酸化PKB的表达水平进行检测；2.通过RT-PCR方法，从人正常卵巢组织中获得目的基因Beclin1，将其插入真核表达载体pcDNA3.1(＋)中，构建真核表达载体pcDNA3.1／Beclin1；3.脂质体法将重组质粒pcDNA3.1／Beclin1、空质粒pcDNA3.1分别转染人卵巢癌细胞株SKOV3。用荧光定量RT-PCR及western blot分别在mRNA和蛋白质水平检测转染前后Beclin1、hvps34、p110α和p-PKB的表达变化。细胞免疫组化方法观察pcDNA3.1／Beclin1转染后SKOV3中Beclin1蛋白表达变化；在电镜和荧光显微镜下观察自噬囊泡；流式细胞仪检测凋亡及自噬情况，并用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响；4.将重组质粒pcDNA3.1／Beclin1转染SKOV3细胞后，接种到裸鼠皮下，观察体内致瘤活性及生长情况；免疫组化检测瘤组织Beclin1蛋白的表达。结果1.Beclin 1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高，在交界性卵巢癌组织中开始下降，在上皮性卵巢癌中的表达最低；p110α、p-PKB在交界性卵巢癌组织中开始升高，在上皮性卵巢癌中的表达明显高于其它3组(P＜0.05)。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢癌组织中Beclin 1的表达均高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者(P＜0.05)，而p110α及p-PKB的表达均低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者(P＜0.05)；2.利用酶切、PCR分析、DNA测序证实，真核表达载体pcDNA3.1／Beclin1构建成功；3.pcDNA3.1／Beclin1转染后SKOV3细胞Beclin1表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞；pcDNA3.1／Beclin1转染后hvps34表达上调，而p110α、p-PKB的表达下调。pcDNA3.1／Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1／Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加。pcDNA3.1／Beclin1转染后SKOV3的凋亡率为(21.26±3.89)％，高于pcDNA3.1转染组和未转染组，差异有显著性(P＜0.05)；与未转染组相比，G1期细胞比例明显增多，S期细胞比例明显降低。流式细胞仪检测pcDNA3.1／Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1／Beclin1转染SKOV3后细胞的体外增殖能力明显弱于转染空质粒组和未转染组，细胞抑制率为58.68％(P＜0.05)。 4.重组质粒pcDNA3.1／Beclin1使卵巢癌SKOV3细胞裸鼠体内成瘤时间延长，瘤体体积及重量明显小于空质粒组和空白对照组，抑瘤率为50.27％。免疫组化显示SKOV3-Beclin1组Beclin1蛋白表达强于SKOV3-pcDNA3.1组和SKOV3组，肿瘤组织坏死增加。结论自噬基因Beclin 1在上皮性卵巢癌组织中的表达下调，对自噬起调控作用的PI3K／PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、p-PKB存在表达异常，可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关；自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使ClassⅢPI3K(hvps34)表达上调，ClassⅠPI3K(p110α)及其下游的p-PKB表达下调；自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可诱导肿瘤细胞自噬和凋亡的发生，抑制SKOV3在体内、体外的增殖，针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。