禽腺病毒（FAd V）遍布世界各地,起初FAd V分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个群,后来依据交叉中和反应结果将FAd V分为12个血清型（FAd V-1～8a和8b～11）,依据其分子结构特征分为5个种（FAd V-A～E）,12个血清型均能导致IBH,死亡率接近10%,典型特征是肝脏坏死。FAd V-1（CELOV）也能导致肌胃糜烂。包涵体肝炎-心包积液综合征（HHS）是FAd V引起的最严重的疾病,大部分由4型和8型禽腺病毒引发。1986年,心包积液综合征首次出现在巴基斯坦地区,随后逐渐蔓延到世界各地。2012年开始,国内养殖场开始出现由FAd V引发的包涵体肝炎、心包积液的病例。2015年,国内多个省份FAd V感染的情况持续加剧,鸡群表现突然发病,死亡率高达30%～70%,给国内养鸡业造成了严重的经济损失。近几年,世界各地的HHS病例也呈上升趋势,包括印度、加拿大、日本、韩国等。2015年河南某鸡场暴发了HHS,为研究其致病机制,本研究采集发病鸡的肝脏和心包积液,研磨后吸取上清液,在CEL上进行分离纯化,可见细胞明显病变,脱落呈葡萄串状聚集。命名分离株为K株,提取纯化后病毒的DNA,进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,与Genbank中其他腺病毒进行氨基酸序列同源性分析和遗传进化分析,结果表明,本研究分离的K株与C种血清4型的FAd V同源性高达93.6%,亲缘关系最近,说明K株为C种血清4型的FAd V。同时对K株进行生物学特性研究,K株接种1日龄、64日龄、220日龄SPF鸡,结果都达到100%死亡,表明K株致病性很强。用福尔马林灭活的K株的20%肝组织匀浆与ISA71 VG佐剂高速剪切制备油乳苗,为了探究能够有效预防鸡HHS疫苗所需的最小病毒量,制备了分别含10~6TCID50、10~5TCID50、10~4TCID50、10~3TCID50的4种不同病毒量的油乳苗,免疫3周龄SPF鸡,并设置对照组,免疫4周后,各组接种10~6TCID50的K株,每天观察鸡的精神状态,记录死亡时间,一直持续到攻毒后14天。根据攻毒保护试验的结果,表明A组制备的疫苗最低应含有10~6TCID50病毒量可以实现对鸡群的完全保护,说明K株有很好的免疫原性,可以作为制备预防禽腺病毒感染的疫苗的候选毒株。为适用于FAd V临床的大批量检测,本研究利用K株制备的标准品建立TaqMan探针荧光定量PCR方法检测FAd V,扩增效率高达93.87%,相关系数为0.998接近于1,特异性高,重复性好,最低检测FAd V模板浓度为2×10~1copies/u L,与常规PCR相比,敏感10倍,对促进养禽业健康发展具有重要意义。应用建立的荧光PCR方法检测K株感染3周龄SPF鸡后对不同组织的嗜性,结果表明,3周龄SPF鸡感染K株后,在鸡的组织中广泛分布,组织中K株的病毒量在3dpi能检测出拷贝数,8dpi时病毒量最高,其中肝脏的病毒拷贝数最高为2.208×10~8copies/g,心脏的病毒拷贝数为2.723×10~6copies/g,在胸腺中的病毒量最少,为8.710×10~4copies/g,说明K株对肝脏的嗜性最大,对胸腺的嗜性最小,为广嗜性病毒。