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新生仔猪腹泻是危害养猪业的重要疾病;尽管导致仔猪腹泻的原因非常复杂,但大肠杆菌作为其主要病原已经明确。该研究根据GeneBank发表的大肠杆菌肠毒素ST1、ST2、LT1以及耶尔森氏菌强毒力岛(high pathogenicity island,HPI)的基因序列分别设计特异性引物,建立了检测相应毒力因子的PCR方法。通过对已知毒力型参考菌株的扩增,证明了所建立的PCR方法能够特异鉴定产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)和HPI~+大肠杆菌。采集临床151例仔猪腹泻病例的肛拭子样品,接种LB肉汤于37℃增菌培养4~6h后,用所建立的PCR方法进行检测,结果表明有95例(62%)为HPI~+大肠杆菌感染,14例(9.27%)为HPI~+大肠杆菌感染与ETEC混合感染,24例(15.8%)为ETEC感染。此外,通过对健康新生仔猪54份样品的检测,发现28例(51.8%)样品携带HPI~+大肠杆菌,6例(11%)携带ETEC(主要为ST2~+),未发现所检测的其它毒力因子,这表明HPI~+大肠杆菌很可能是条件性致病菌。为了揭示仔猪源大肠杆菌的O抗原型和主要毒力因子的相关性以及筛选具有优势血清型和优势毒力因子的疫苗侯选株,经快速检测为毒力因子阳性的粪便样品进行了广泛的细菌分离。经生化试验以及毒力因子的PCR鉴定,共分离鉴定到89株大肠杆菌。通过对这89株分离株的O血清型与致病性大肠杆菌类型进行相关性分析,结果显示,除20株未定型,69株大肠杆菌分属6种不同的血清型,最流行的血清型为O138,共39株(44%),其次为O65 11株(12%);其中ETEC的主要血清型为O138(13%)、O65(2%)、O21(2%);HPI~+大肠杆菌的主要血清型为O138(21%)、O65(8%)、O21(6%)、O141(3%)、O9(2%)、O159(2%);ETEC且携带HPI~+大肠杆菌的主要血清型为O138(9%)、O65(2%)、O9(2%)、O139(1%)、O55(1%);进一步分析显示,HPI与ETEC高度相关,36株ETEC中,携带HPI~+有14株(39%);菌毛检测发现,K88、987P是主要的黏附因子。运用黏附素单抗对黏附素阳性菌株进行检测筛选,结果只有部分K88阳性菌株体外表达菌毛。结合PCR检测,血清型鉴定,体外黏附素表达检测,菌株O138:HPI:K88:LT1可作为用于预防仔猪腹泻的疫苗候选株。在致仔猪腹泻大肠杆菌主要毒力因子分子流行病学和血清流行病学调查的基础上,筛选了用于预防仔猪腹泻的多价灭活疫苗,经成品检验合格后免疫怀孕母猪,同时以商品化的三价苗为对照,通过定期采集母猪分娩后的乳汁,分离乳清进行乳清中K88、987P、FyuA特异性抗体效价的测定。结果表明,在母猪分娩后不同时段,各免疫组别乳清中K88菌毛抗体的抗体效价具有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。各免疫组别乳清中987P菌毛抗体的抗体效价也具有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。其中本研究的多价苗与对照组差异极显著(P<0.01)。而各免疫组别乳清中FyuA抗体的抗体效价仅在分娩后第一天差异显著(P<0.01或P<0.05)。从抗体效价的动态变化规律来看,通过两针免疫母猪,其初乳中抗体的效价在分娩后一天为最高,以后逐渐下降,其中K88菌毛抗体在分娩后一周几乎检测不到抗体效价,而987P菌毛的抗体效价可以维持产后14天,而FyuA抗体的效价在分娩后波动不大。利用抗大肠杆菌K88和987P多价乳清抗体对K88和987P菌毛与小肠上皮细胞的黏附特性进行了研究,结果表明免疫组和对照组母猪分娩后一天抗大肠杆菌K88和987P多价乳清抗体均能抑制K88~+和987P~+大肠杆菌与小肠上皮细胞的黏附,进一步研究表明,免疫组和对照组母猪分娩后七天抗大肠杆菌K88多价乳清抗体不能抑制K88~+大肠杆菌与小肠上皮细胞的黏附,而免疫组母猪分娩后七天抗大肠杆菌987P多价乳清抗体能明显抑制987P~+大肠杆菌与小肠上皮细胞的黏附。