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目的大肠癌包括结、直肠癌，是常见的严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一，其发病机制还没有完全明确,癌基因激活与抑癌基因失活、信号通路改变、细胞微卫星不稳定性、基因多态性都可能诱导其发生。既往的研究表明，微小RNA （microRNA，miRNA）在多种肿瘤的发生、演进、侵袭、转移和血管生成中起到了重要作用，包括大肠癌。本研究利用基因芯片技术对比分析大肠癌患者癌组织与癌旁正常黏膜组织中miR-224和miR-378e表达的差异，应用实时荧光定量PCR验证，并通过分析其与临床病理资料之间的关系，以期筛选到大肠癌特征性的miRNA及治疗靶分子，为进一步研究miR-224和miR-378e在大肠癌中生物学功能及相关下游靶标基因奠定基础。方法1收集河北医科大学第一医院及河北唐山工人医院2011年5月～2012年5月大肠癌住院行大肠癌根治术手术病人标本44例。所有病人术前均未行放、化疗及免疫治疗。收集病人的性别、年龄、Dukes分期、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结状态、浸润深度、分化程度等临床病理资料。全部患者44例均行u6、miRNA-224、miRNA-378e检测，其中男性29人，女性15人。年龄29～83岁，中位年龄65岁。实验分组按标本取材分为大肠癌组、癌旁正常黏膜组织组。2TrizoL法提取大肠癌组织及癌旁正常组织中总RNA。选取3例大肠癌组织及配对的正常黏膜组织RNA送美国LC Sciences公司进行miRNA表达芯片分析，初步筛选有表达差异的miRNAs。反转录按照美国fermentas公司反转录试剂盒说明书操作；ReaL-time qPCR检测大肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miRNA-224、miR-378e的表达，引物购自广州锐博公司，按说明书操作。反应条件：95℃预变性10min，然后按95℃×10s，60℃×30s，72℃×10s，进行45个循环，重复3次取平均值。本研究采用2-ΔΔCT法，其中ΔCT为CT靶基因与CTU6的差值，ΔΔCT为ΔCT癌组织与ΔCT正常组织的差值。3实验数据处理：采用SPSS13.0统计软件进行分析，偏态分布资料以M（P25，P75）表示，采用非参数检验Mann Whitney分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果1miR-224在大肠癌组织中的表达及临床意义（表1）1.1基因芯片结果显示miR-224在癌组织中的信号强度为170，而正常黏膜组织中仅为29，经对数标准化后miR-224在癌组织中表达上调2.52倍。在临床样本中验证结果显示，miR-224在44例患者癌组织、正常黏膜组织中表达量分别为3.949×10-5（1.495×10-5，9.594×10-5）、9.686×10-6（3.277×10-6，3.274×10-5），差异有统计学意义（Z=-3.547，P＜0.01）。1.2miR-224与大肠癌临床病理特征的关系：miR-224的表达与性别不相关。男性组中相对表达量为2.760（1.160，14.249），女性组中相对表达量为2.938（1.383，12.492），两者相比较，P=0.921，无统计学意义。miR-224的表达与年龄不相关。<65岁组中相对表达量为2.83（31.428，7.277），≥65岁组中相对表达量为4.328（1.077，14.978），两者相比较，P=0.707，无统计学意义。miR-224的表达与肿瘤部位不相关。直肠癌组中相对表达量为6.320（1.337，14.249），结肠癌组中相对表达量为2.108（1.132，6.959），两者相比较，P=0.285，无统计学意义。miR-224的表达与浸润深度不相关。T1+T2组中相对表达量为2.436（0.794，14.914），T3+T4组中相对表达量为2.938（1.383，12.492），两者相比较，P=0.698，无统计学意义。miR-224的表达与淋巴结转移不相关。无淋巴结转移组中相对表达量为2.744（1.365，12.858），淋巴结转移组中相对表达量为4.447（1.165，15.587），两者相比较，P=0.802，无统计学意义。miR-224的表达与Dukes分期不相关。A+B组中相对表达量为2.744（1.365，12.858），C+D组中相对表达量为4.447（1.165，15.587），两者相比较，P=0.802，无统计学意义。miR-224的表达与分化程度不相关。低分化组中相对表达量为2.050（1.464，5.680），中高分化组中相对表达量为3.837（1.146，13.853），两者相比较，P=0.583，无统计学意义。miR-224的表达与组织学类型相关。管状腺癌组中相对表达量为1.992（1.043，3.081），非管状腺癌（黏液腺癌，乳头状腺癌）组中相对表达量为9.245（1.857，115.853），两者相比较，P=0.013，差异有统计学意义。此次试验结果提示结直肠癌组织中miR-224的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、Duke分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度不相关，而与重新分组后的组织学类型相关。2miR-378e在大肠癌组织中的表达及临床意义（Table1）2.1基因芯片结果显示miR-378e在癌组织中的信号强度为238，而正常黏膜组织中为920，经对数标准化后miR-378e在癌组织中表达下调1.98倍。在临床样本中验证结果显示，miR-378e在44例患者癌组织、正常黏膜组织中的表达量分别为3.338×10-7（9.267×10-8，1.434×10-6），9.094×10-7（2.969×10-7，7.619×10-6），差异有统计学意义（Z=-2.892，P＜0.01）。2.2miR-378e与大肠癌临床病理特征的关系：miR-378e的表达与性别不相关。男性组中相对表达量为0.29（90.077，0.799），女性组中相对表达量为0.282（0.066，1.122），两者相比较，P=0.931，无统计学意义。miR-378e的表达与年龄不相关。<65岁组中相对表达量为0.307（0.006，0.965），≥65岁组中相对表达量为0.245（0.085，0.536），两者相比较，P=0.707，无统计学意义。miR-378e的表达与肿瘤部位不相关。直肠癌组中相对表达量为0.150（0.057，0.967），结肠癌组中相对表达量为0.308（0.183，0.888），两者相比较，P=0.307，无统计学意义。miR-378e的表达与淋巴结转移不相关。无淋巴结转移组中相对表达量为0.245（0.057，0.793），淋巴结转移组中相对表达量为0.299（0.118，2.222），两者相比较，P=0.334，无统计学意义。miR-378e的表达与Dukes分期不相关。A+B组中相对表达量为0.245（0.057，0.793），C+D组中相对表达量为0.299（0.118，2.222），两者相比较，P=0.334，大于0.05，无统计学意义。miR-378e的表达与组织学类型不相关。管状腺癌组中相对表达量为0.188（0.038，0.780），非管状腺癌（黏液腺癌，乳头状腺癌）组中相对表达量为0.324（0.120，1.553），两者相比较，P=0.200，无统计学意义。miR-378e的表达与分化程度不相关。低分化组中相对表达量为0.340（0.129，2.645），中高分化组中相对表达量为0.276（0.060，0.787），两者相比较，P=0.282，无统计学意义。miR-378e的表达与浸润深度相关。T1+T2组中相对表达量为0.012（0.001，0.150），T3+T4组中相对表达量为0.298（0.080，1.018），两者相比较，P=0.027，差异有统计学意义。此次试验结果提示大肠癌组织中miR-378e的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、Duke分期、淋巴结转移、组织学类型、分化程度不相关，而与重新分组后的浸润深度相关。结论1miR-224在大肠癌组织中表达上调，且在非管状腺癌中表达较高，提示其可能对大肠癌的预后有影响。2miR-378e在大肠癌组织中表达下调，且与浸润深度相关，可能发挥类似抑癌基因作用。3miR-224和miR-378e可作为潜在的大肠癌分子标记物。