目的:核酸适配体是一种可与特定的药物、蛋白质等目标物质特异性结合的短链DNA、RNA、核酸类似物或肽的片段。利用其灵敏度高、特异性好的特点,常作为药物递送的载体、基因治疗的识别物以及灵敏检测的传感器部件。凝血酶是一种在生物体抗凝、促凝的凝血级联反应中有重要作用的生物活性蛋白。药物凝血酶能以局部喷雾或口服、局部灌注等方式用于手术、外伤等出血的止血。此外,凝血酶对肿瘤细胞的生长具有调节作用,在激活正常细胞的致瘤性和恶性细胞转移方面也扮演着重要角色,凝血酶的检测具有重要的临床诊断意义。研究方法:本文利用激光可使纳米金修饰的双链DNA解链释放出单链凝血酶适配体并与凝血酶特异性结合的特点,设计了一种新颖、简捷且高灵敏的凝血酶检测方法。首先,利用柠檬酸钠还原氯金酸的方法,制备了16nm金纳米粒子。其次,使用TCEP还原适配体末端二硫键,并与互补链结合成双链结构。之后,将双链与金纳米粒子结合,完成传感器的组装。基于纳米粒子复合物的激光诱导释放已经被广泛应用于基因治疗及药物递送等领域。纳米金具有特殊的物理性质,通过激光照射其表面可以实现粒子周围的局部加热,使纳米金粒子周围温度升高,而溶液整体温度几乎不变。不同种类激光照射后,产生的效果有所不同。脉冲激光倾向于以破坏金硫键(Au-S)释放DNA实现药物递送等目的,而小功率的连续激光常以去杂化的形式释放单链,使单链的功能性很好的体现。CW激光诱导的DNA释放,为适配体的应用提供了更加广泛的思路。最终,通过条件优化、定量研究、选择性研究以及回收率实验,实现并优化该传感器对于凝血酶检测的目的。结果:本文概述了纳米金核酸适配体传感器检测技术的研究进展,并着重介绍了该实验的目的、意义、解决问题以及创新点及思路。构建了以纳米金核酸适配体传感器为核心的凝血酶检测体系。成功制备了平均粒径16nm的纳米金,将27个碱基的凝血酶单链适配体与其互补链合成双链,并在适配体两端分别修饰荧光物质与纳米金(AuNPs)以合成稳定的纳米金-适配体传感器。通过连续(CW)激光照射,适配体单链释放至检测液并与靶标凝血酶结合,借助适配体两端分别修饰的纳米金及荧光物质所产生的猝灭,实现对于凝血酶的检测,并根据实验影响因素优化实验条件。结论:进行定量分析,得到浓度相关拟合曲线,以及该方法检出限0.55nM。进行选择性实验,证实该方法不受干扰物影响,选择性良好。并在人血清条件下,验证该检测方法依然有效,具有推广至临床实验的潜在价值。