目的:构建圆柱瘤基因CYLD(cylindromatosis)的重组真核细胞表达载体pcDNA3.1(-)/CYLD并在乳腺癌Bcap37细胞中稳定表达,进而研究CYLD对乳腺癌Bcap37细胞的作用及可能的机制。方法:CYLD基因从国外基因库调取,pcDNA3.1(-)/CYLD真核表达载体的构建由上海吉凯基因化学技术有限公司完成。采用脂质体法将pcDNA3.1(-)/CYLD转入人乳腺癌Bcap37细胞,利用G418筛选获得带有pcDNA3.1(-)/CYLD的细胞。通过MTT、平板克隆形成试验检测细胞体外增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)/CYLD成功导入Bcap37细胞中并能稳定表达,MTT检测结果显示, 490nm的光吸收值(A490nm)降低,Bcap37细胞生长能力明显受到抑制,根据测定出的生长曲线,细胞培养至第7天时,细胞生长抑制率为72.5%。平板克隆检测克隆形成率降低,与重组质粒pcDNA3.1(-)/CYLD转染组和未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测显示,转染后Bcap37细胞中CYLD的表达升高。结论:pcDNA3.1(-)/CYLD转染乳腺癌Bcap 37细胞成功并稳定表达,CYLD对乳腺癌细胞的生物学行为呈负调控,为CYLD基因的进一步研究奠定了基础,有可能为乳腺癌的基因治疗提供新的靶点。