论文部分内容阅读
第一部分 miR-21对ox-LDL刺激下单核巨噬细胞功能影响及机制研究[目的]既往研究发现microRNA-21(miR-21)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)预处理的人外周血单个核细胞和人动脉粥样硬化斑块组织中表达上升,但miR-21在其中所起的作用尚不可知。因此,本研究拟体外培养人单核/巨噬细胞,ox-LDL刺激造动脉粥样硬化模型,观察miR-21对巨噬细胞泡沫化过程中迁移能力、炎症、脂质吞噬的影响并初步探讨其机制。[方法]我们体外培养人单核细胞系(THP-1细胞),160nmol/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞(con组),50mg/Lox-LDL处理巨噬细胞 24 小时(ox-LDL 组),miR-21 inhibitors 及 miR-21 inhibitors negative转染巨噬细胞后50mg/L ox-LDL处理巨噬细胞24小时(miR-21 inhibitor组及miR-21 inhibitor nc组),transwell法检测细胞迁移功能,ELISA法检测细胞上清炎症因子分泌情况,油红O染色定性分析巨噬细胞脂质吞噬能力,实时定量PCR法检测miR-21表达情况,western blot法检测DUSP-8表达量及JNK、p38通路磷酸化水平。[结果]miR-21对ox-LDL刺激下巨噬细胞炎症因子分泌,脂质吞噬无明显影响,主要调控ox-LDL刺激下巨噬细胞迁移功能。与con组对比,ox-LDL组巨噬细胞miR-21表达水平升高,DUSP-8表达量降低,JNK及p38磷酸化水平升高,巨噬细胞迁移功能增强。体外转染miR-21 inhibitor组后,巨噬细胞miR-21表达水平降低,DUSP-8表达量升高,JNK及p38磷酸化水平降低,巨噬细胞迁移功能减弱。相比野生型小鼠,miR-21 KO小鼠腹腔巨噬细胞DUSP-8表达量升高,JNK及p38磷酸化水平降低,细胞迁移功能减弱。[结论]ox-LDL刺激下,巨噬细胞迁移功能增强,可能与其升高miR-21表达水平,降低DUSP-8表达量,JNK及p38磷酸化水平升高有关。第二部分 瑞舒伐他汀对ox-LDL刺激下单核巨噬细胞迁移功能干预作用[目的]瑞舒伐他汀在临床上发挥着抗动脉粥样硬化多效性作用,而其是否通过miR-21调控ox-LDL刺激下单核/巨噬细胞迁移功能仍未明确。因此,本研究拟在此基础上,通过体外实验研究瑞舒伐他汀对ox-LDL刺激下单核/巨噬细胞迁移功能的影响,并对相关的机制进行初步探讨。[方法]体外培养人单核细胞系(THP-1细胞),160nmol/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,50mg/Lox-LDL处理巨噬细胞24小时(ox-LDL组),不同浓度瑞舒伐他汀干预巨噬细胞(statin组),miR-21mimics 及miR-21 mimics negative转染巨噬细胞(miR-21 mimics组及miR-21 mimics negative组),CCK8法测定瑞舒伐他汀药物毒性,transwell法检测巨噬细胞迁移功能,实时定量PCR检测miR-21表达情况,westernblot法检测DUSP-8表达量及JNK,p38通路磷酸化水平。[结果]与ox-LDL组对比,statin组巨噬细胞miR-21表达水平降低,DUSP-8表达量升高,JNK及p38磷酸化水平降低,巨噬细胞迁移功能减弱。体外转染miR-21 mimics后,巨噬细胞miR-21表达水平升高,DUSP-8表达量降低,MAPK通路中JNK及p38磷酸化水平升高,巨噬细胞迁移功能增强。[结论]瑞舒伐他汀可减弱ox-LDL刺激下巨噬细胞迁移功能,可能与其降低miR-21表达水平,升高DUSP-8表达量,JNK及p38磷酸化水平降低有关。