斯氏艾美耳球虫（Eimeria stiedae）寄生于肝脏,入侵胆管上皮细胞,可引起严重的肝球虫病。兔球虫病主要通过药物防治,随着耐药株的出现和饲料减抗、替抗、禁抗的推进,药物防治局限性逐渐显现。兔球虫病疫苗还处于研发阶段,目前尚无商品化疫苗注册上市。本研究进行了斯氏艾美耳球虫泛素结合酶UCE、延伸因子EFG、致密颗粒蛋白DG32重组蛋白的原核表达及免疫保护效果评价,为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研究提供参考。一、斯氏艾美耳球虫UCE、EFG、DG32基因的转录水平分析与原核表达本研究结合实验室测定的斯氏艾美耳球虫转录组数据成功扩增出Es-UCE、Es-EFG和Es-DG32基因并对3个基因的氨基酸序列进行多序列比对。利用相对荧光定量PCR分析3个基因在斯氏艾美耳球虫不同发育阶段的转录水平,进行3个基因的原核表达、蛋白纯化与免疫印迹分析。结果表明:三个基因均在裂殖生殖阶段高表达,UCE氨基酸序列、EFG氨基酸序列相似性较高,而DG32氨基酸序列相似性较低。重组UCE蛋白表达在上清液中,而EFG重组蛋白和DG32重组蛋白均表达在包涵体中;三个蛋白均能被感染斯氏艾美耳球虫的兔阳性血清识别,具有良好的反应原性。二、斯氏艾美耳球虫（r Es-UCE、r Es-EFG、r Es-DG32）重组蛋白对家兔的免疫保护效果评价通过对斯氏艾美耳球虫3个重组蛋白（r Es-UCE、r Es-EFG和r Es-DG32）对家兔的免疫保护效果进行初步评价后筛选出r Es-UCE用于免疫保护试验,将42只45日龄无球虫兔分为5组（空白对照组、攻虫对照组、空载蛋白对照组、皂素佐剂对照组和r Es-UCE免疫组,每组8～10只兔）,采用颈部皮下注射方式进行首免,14 d后同等剂量进行二免。二免后14 d攻虫。感染后定期观察各组兔的临床症状、称重、采血和采粪样并在感染21 d后剖检。r Es-UCE免疫组平均增重为536±85.95 g,显著大于攻虫对照组（P＜0.05）;每克粪便卵囊数为0.26×10~6个,平均肝指数为3.95,显著低于攻虫对照组（P＜0.05）。r Es-UCE免疫组相对增重率达90.69%,卵囊减少率达78.81%,料肉比降低。r Es-UCE免疫后血清中IL-2、IL-10、IL-17和IFN-γ水平及特异性Ig G抗体水平显著升高（P＜0.05）,能诱导机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应。