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目的:本课题以人正常肝细胞HL-7702为研究对象,研究补骨脂诱发肝损伤机制,阐释药对补骨脂-五味子和补骨脂-生地黄配伍减毒的机制,确定能够减少或消除补骨脂致肝损伤的最佳配伍方式,以期为治疗肝损伤的新药研发奠定基础。方法:1.高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）法测定补骨脂、五味子和生地黄中有效成分的含量。中药饮片补骨脂、五味子和生地黄分别加水泡30min,水煎3次,加热浓缩至1 g·mL-1。将浓缩液置于低温高速离心机4℃、5000 r·min-1离心（离心半径8.6 cm）,10 min后取上清液,用孔径0.22 μm微孔滤膜过滤除菌,分装保存于-20℃。对于HPLC分析,取20 mL药液继续浓缩,冷冻干燥,-20℃密封保存。依据《中国药典》（2020版）记载,通过HPLC使用标准曲线法对补骨脂中有效成分补骨脂素和异补骨脂素、五味子中有效成分五味子酯甲以及生地黄中有效成分梓醇进行含量测定。2.MTT法检测补骨脂、五味子和生地黄对HL-7702细胞存活率的影响,确定补骨脂诱导HL-7702细胞损伤的适宜浓度,建立肝细胞损伤模型,并确定五味子和生地黄的适宜给药浓度,最终得到补骨脂-五味子和补骨脂-生地黄的最佳配伍浓度。3.补骨脂及其药对配伍对人正常肝细胞HL-7702内质网应激的影响。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time fluorescent quantitative Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）和蛋白印迹法（Western Blot,WB）检测内质网应激信号通路中葡萄糖调节蛋白78（Glucose-regulated protein 78,GRP-78）、蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like ER,PERK）的基因和蛋白表达情况。4.补骨脂及其药对配伍对人正常肝细胞株HL-7702氧化应激的影响。采用微板法检测细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶（Aspartateaminotransferase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）含量;用试剂盒检测细胞培养液中还原型谷胱甘肽（Glutathione,GSH）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量;DCFH-DA荧光定量法检测HL-7702细胞中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）的变化。结果:1.检测出补骨脂、五味子和生地黄中有效成分在各自进样范围内线性关系良好（R＞0.9990）,精密度、稳定性、重复性实验的RSD值均＜3.00%,平均加样回收率为99.79%～100.83%,各成分含量均符合《中国药典》（2020版）标准。2.MTT结果显示,补骨脂作用于HL-7702细胞48 h后的半数抑制浓度（IC50）为1203 μg·mL-1,故使用1200 μg·mL-1补骨脂刺激HL-7702细胞48h建立肝损伤模型。五味子作用于HL-7702细胞48h后IC50为3348 μg·mL-1,生地黄作用于HL-7702细胞48h后IC50为4152 μg·mL-1,并在一定范围内呈剂量依赖性。故将五味子和生地黄的低、中、高浓度分别设置为600、1200和2400μg·mL-1。实验分组如下:空白对照组、补骨脂模型组（补骨脂1200μg·mL-1）、补骨脂-五味子低剂量组（1200 μg·mL-1+600 μg·mL-1）、补骨脂-五味子中剂量组（1200 μg·mL-1+1200 μg·mL-1）、补骨脂-五味子高剂量组（1200 μg·mL-1+2400 μg·mL-1）、补骨脂-生地黄低剂量组（1200 μg·mL-1+600μg·mL-1）、补骨脂-生地黄中剂量组（1200 μg·mL-1/1200 μg·mL-1）、补骨脂-生地黄高剂量组（1200μg·mL-1+2400μg·mL-1）。3.qRT-PCR和WB结果显示,与空白对照组相比,补骨脂模型组HL-7702细胞中GRP-78、PERK基因和蛋白的表达水平显著升高;与补骨脂模型组相比,补骨脂-五味子和补骨脂-生地黄配伍组中HL-7702细胞的GRP-78、PERK基因和蛋白表达水平显著降低,并在一定范围内呈剂量依赖性。4.实验结果表明,与空白对照组相比,补骨脂模型组HL-7702细胞中AST、ALT水平明显升高,GSH、SOD活力明显降低,MDA、ROS的含量明显升高,MMP明显降低;与补骨脂模型组相比,补骨脂-五味子和补骨脂-生地黄配伍组中HL-7702细胞AST、ALT水平明显降低,GSH、SOD活力明显升高,MDA、ROS含量明显降低,MMP明显升高。结论:上述实验结果表明,补骨脂分别与五味子、生地黄配伍后能够降低GRP-78、PERK基因和蛋白表达水平,降低细胞AST、ALT水平,升高GSH、SOD活力,降低MDA、ROS含量,升高MMP,抑制补骨脂导致人肝系HL-7702细胞的内质网应激和氧化应激,进而缓解补骨脂引起的肝损伤。