白羽王鸽生长发育规律及胸肌miRNA表达谱分析

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鸽在中国已经成为继鸡、鸭、鹅之后第四大家禽,鸽肉肉质美味且胸肌重占体重比例最高达30%,研究鸽生长发育规律、寻找与鸽胸肌发育相关miRNA有助于提高肉鸽业生产水平。本试验以白羽王鸽为研究对象,测定了11个时间点共176只白羽王鸽的器官重、胸肌重和体重等,测定了11个时间点白羽王鸽的体斜长、胸深、胸宽、胸围、胸宽、龙骨长和骨盆宽等体尺指标,用Von Bertallanffy、Gompertz和Logistic3种模型拟合了白羽王鸽生长发育曲线,用SPSS22.0分析了11个时间点体重与各体尺指标的关系;用石蜡切片分析了白羽王鸽1d、28d、2y胸肌组织学特点;用高通量测序、qPCR、短时间序列表达挖掘(STEM)等方法,鉴定分析了白羽王鸽1d、28d、2y三个阶段胸肌miRNA及其表达谱;用TUNEL法分析了cli-miR-20b-5p与胸肌细胞凋亡的关系。主要研究结果如下:(1)白羽王鸽体重累积生长曲线呈“S”型,最佳拟合模型为Von Bertalanffy(拟合度0.998),拐点日龄为8.75d,拐点体重为144.28g;白羽王鸽生长发育主要在28日龄前完成,28日龄体重已达成年体重80%以上,但胸肌重量仅为成年时的53.88%,28日龄和2年肌纤维面积高于1日龄。(2)28日龄体重与体斜长,体重与龙骨长呈极显著正相关(p<0.01),相关系数分别为0.897和0.658;建立了体斜长、龙骨长以及所测体尺与体重之间的回归系数,分别为0.804、0.432和0.876,均达极显著。(3)白羽王鸽心、肝、肺、肾、胰腺等主要脏器的发育模式各不相同,心脏在1d-7d发育迅速,7d-22d略有波动,22d后趋于稳定;肝和胰腺的器官指数在10d时达到峰值,随后持续下降直至试验结束;肾脏在4d前发育迅速,4d后发育持续减缓;肺在25d发育达到最高峰,随后持续下降。(4)3个发育阶段的白羽王鸽胸肌共鉴定出591条成熟miRNAs,其中304条已知miRNA、86条为新发现miRNA、201是已知的保守miRNA;3个阶段共鉴定出189条差异miRNA,共得到1个显著性下调miRNA表达模式,差异miRNA靶基因主要富集于生物合成、调节发育等生物过程以及MAPK等信号通路中。(5)cli-miR-20b-5p mimics处理后上调了Apaf基因表达水平以及降低Bcl-2基因表达水平。结论:28日龄体重与体斜长呈强正相关,体重生长曲线最佳拟合模型为Von Bertalanffy;在不同的发育阶段,白羽王鸽胸肌miRNA的表达谱不同,所筛选差异表达的miRNA靶基因富集于生物合成、发育调节等生物过程,以及MAPK等信号通路中;cli-miR-20b-5p通过上调Apaf基因表达水平以及降低Bcl-2基因表达水平来调控鸽骨骼肌卫星细胞凋亡。上述研究结果为肉鸽专门化品系培育、提高肉鸽饲养管理水平和生产性能提供了科学依据,为深入研究肉鸽积累了基础数据,对肉鸽育种、生产和揭示miRNA在肉鸽骨骼肌发育过程中的作用具有一定的参考意义。
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