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目的
神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，神经胶质瘤的复杂性使得治疗效果仍然很差。神经胶质瘤中microRNA(miRNA)的失调为未来基于miRNA的疗法的发展提供了重要机会。通过高通量测序寻找microRNA-181b(miR-181b)的新靶标，研究miR-181b对神经胶质瘤侵袭、迁移的影响及机制。
方法
通过整合TargetScan软件预测和通过在人神经胶质瘤细胞系U251细胞中过表达miR-181b模拟物进行转录组学分析来筛选神经胶质瘤中miR-181b的潜在靶标。为了研究神经胶质瘤中miR-181b的分子机制，将miR-181b双链分子RNA(模拟物)转染到U251细胞中，并在转染后48小时进行转录组学测序分析分析。CellCountingKit-8(CCK-8)通过在酶标仪上测量450nm的吸光度来评估细胞活力。应用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测miR-181b的表达，免疫组织化学染色检测标本P53、细胞周期素G1(Cyclin G1, CCNG1)的表达：统计分析胶质瘤miR-181b与、CCNG1表达的关系与胶质瘤预后等的表达的关系。
结果
通过结合两种公开可用的算法(TargetScan )和转录谱，筛选了miR-181b的28个候选靶基因。其中之一，与细胞周期素G1(Cyclin G1, CCNG1)是最近表征的癌蛋白，再进行了双重荧光素酶报告基因测定。在细胞中，用miR-181b转染显着降低psi-CHECK-2-CCNG1-UTR的活性，但没有降低psi-CHECK-2-CCNG1-mut-UTR的活性。综上所述，这些数据表明CCNG1可能是miR-181b的直接靶标。为了能够进一步阐释CCNG1对胶质瘤的增殖和凋亡产生的影响，先分别在神经胶质细胞以及神经胶质母细胞瘤细胞中进行Q-PCR实验，结果显示：CCNG1在正常神经胶质细胞中的表达明显低于在神经胶质母细胞瘤细胞株U87MG和U251的表达，CCNG1过表达慢病毒载体感染的细胞系与低表达慢病毒载体感染的细胞系与空载体对照组相比，即miR?181bmimic、miR?181binhibitor两组及对照组的，应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况，通过miR?181bmimic吸光度的结果最低，表明miR?181b的靶向抑制减弱了胶质瘤的恶性特性。同样运用Transwell侵袭实验检测这三组显示：CCNG1的过表达分别显著促进了细胞迁移和侵袭(P<0.05)。最后与转染了杂乱的RNA对照的细胞相比，转染了CCNG1siRNA与miR?181b的U251细胞的集落形成能力显着降低(P<0.05)，这些数据表明下调CCNG1靶向抑制减弱了胶质瘤的恶性特性。即在神经胶质瘤细胞系miR-181b的过表达导致CCNG1mRNA水平的适度降低和CCNG1蛋白水平的降低。这些发现揭示了CCNG1的致癌作用，并为神经胶质瘤提供了基于miR-181b的治疗方法。即首次调查了CCNG1和miR-181b与神经胶质瘤的关系。
结论
1．CCNG1是miR-181b的一个靶基因。
2．miR-181b靶向调控CCNG1参与抑制神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭。
神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，神经胶质瘤的复杂性使得治疗效果仍然很差。神经胶质瘤中microRNA(miRNA)的失调为未来基于miRNA的疗法的发展提供了重要机会。通过高通量测序寻找microRNA-181b(miR-181b)的新靶标，研究miR-181b对神经胶质瘤侵袭、迁移的影响及机制。
方法
通过整合TargetScan软件预测和通过在人神经胶质瘤细胞系U251细胞中过表达miR-181b模拟物进行转录组学分析来筛选神经胶质瘤中miR-181b的潜在靶标。为了研究神经胶质瘤中miR-181b的分子机制，将miR-181b双链分子RNA(模拟物)转染到U251细胞中，并在转染后48小时进行转录组学测序分析分析。CellCountingKit-8(CCK-8)通过在酶标仪上测量450nm的吸光度来评估细胞活力。应用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测miR-181b的表达，免疫组织化学染色检测标本P53、细胞周期素G1(Cyclin G1, CCNG1)的表达：统计分析胶质瘤miR-181b与、CCNG1表达的关系与胶质瘤预后等的表达的关系。
结果
通过结合两种公开可用的算法(TargetScan )和转录谱，筛选了miR-181b的28个候选靶基因。其中之一，与细胞周期素G1(Cyclin G1, CCNG1)是最近表征的癌蛋白，再进行了双重荧光素酶报告基因测定。在细胞中，用miR-181b转染显着降低psi-CHECK-2-CCNG1-UTR的活性，但没有降低psi-CHECK-2-CCNG1-mut-UTR的活性。综上所述，这些数据表明CCNG1可能是miR-181b的直接靶标。为了能够进一步阐释CCNG1对胶质瘤的增殖和凋亡产生的影响，先分别在神经胶质细胞以及神经胶质母细胞瘤细胞中进行Q-PCR实验，结果显示：CCNG1在正常神经胶质细胞中的表达明显低于在神经胶质母细胞瘤细胞株U87MG和U251的表达，CCNG1过表达慢病毒载体感染的细胞系与低表达慢病毒载体感染的细胞系与空载体对照组相比，即miR?181bmimic、miR?181binhibitor两组及对照组的，应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况，通过miR?181bmimic吸光度的结果最低，表明miR?181b的靶向抑制减弱了胶质瘤的恶性特性。同样运用Transwell侵袭实验检测这三组显示：CCNG1的过表达分别显著促进了细胞迁移和侵袭(P<0.05)。最后与转染了杂乱的RNA对照的细胞相比，转染了CCNG1siRNA与miR?181b的U251细胞的集落形成能力显着降低(P<0.05)，这些数据表明下调CCNG1靶向抑制减弱了胶质瘤的恶性特性。即在神经胶质瘤细胞系miR-181b的过表达导致CCNG1mRNA水平的适度降低和CCNG1蛋白水平的降低。这些发现揭示了CCNG1的致癌作用，并为神经胶质瘤提供了基于miR-181b的治疗方法。即首次调查了CCNG1和miR-181b与神经胶质瘤的关系。
结论
1．CCNG1是miR-181b的一个靶基因。
2．miR-181b靶向调控CCNG1参与抑制神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭。