生淀粉糖化酶菌株SDE的选育、产酶条件及酶学性质初步研究

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糖化酶,全称葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase EC.3.2.1.3),又称淀粉葡萄糖酶,功能在于从淀粉、糊精或糖原等碳水化合物的非还原性末端释放β-D-葡萄糖,被广泛地应用于食品、医药、发酵等工业,具有很高的商业价值,是我国产量最大的酶制剂产品之一。一般的糖化酶只能作用于糊化和液化后的淀粉。生淀粉糖化酶是指对不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒具有水解活性产生葡萄糖的酶类,简化了传统淀粉水解工艺中的糊化、液化和糖化步骤,具有良好的节能前景。因此,分离和筛选生淀粉糖化酶菌株受到广大研究者的高度重视。 本文从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株SDE,经形态、生理生化及16S rDNA序列分析将其鉴定为Cellulosimicrobium sp.。 SDE菌株的最适生长温度和pH分别为30℃和pH7.0。在供试的几种碳源中,SDE对半乳糖利用最好;以有机氮为氮源时生长较好,在供试的几种无机氮源中,SDE对NH4NO3利用最好;该菌株除对庆大霉素、卡那霉素有抗性外,对氨苄青霉素、红霉素、青霉素、链霉素、氯霉素、利福平和四环素均敏感。 该酶以生玉米淀粉为底物时,最适作用pH6.0,最适作用温度40℃;SDE菌株产生的生淀粉糖化酶在50℃以上热稳定性较差;但Ca2+可提高粗酶液的热稳定性,在Ca2+存在下80℃处理一个小时后,酶活仍保持在50%以上;但粗酶液的酸碱稳定性不好,只有在pH6.0-7.0酶能保持较高的活力。Ca2+、Zn2+对酶有激活作用;但Ba2+、Cu2+的存在对酶有抑制作用。生淀粉糖化酶为胞外酶和诱导酶。 以SDE为出发菌株,通过HNO2诱变处理,获得了一株突变株SDE-28,其产酶能力由176.5U/mL提高到288U/mL。突变株SDE-28再经过紫外诱变,经筛选后获得了一株稳定性较好的生淀粉糖化酶高产菌株SDE-28-10,酶活达到了409U/mL。与出发菌株SDE相比,SDE-28-10突变株产酶活力提高了1.32倍。 通过碳氮源的正交实验优化了SDE-28-10菌株产酶的发酵培养基。其最佳培养基组成是:玉米粉409,黄豆粉309,麦麸109,MgSO4·7H2O0.15g,ZnSO40.15g,K2HPO41g,水1000 mL。在此培养基中,SDE-28-10发酵液的酶活达到500 U/mL。
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