薰衣草有效成分的抗肿瘤作用及其机制研究

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目的:观察薰衣草有效成分对小鼠移植性实体瘤H22的影响及对HepG-2的作用,并初步探讨其作用机制。方法:以不同浓度的19-羟基乌苏酯处理HepG-2细胞,应用MTT法测定其抗增殖作用、测定培养上清液的LDH比活性、HE染色观察细胞形态学的变化、用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡、Annexin-V/PI双染法测定凋亡率、western blot检测Bax和Bcl-2的蛋白表达、测定含19-羟基乌苏酯的血清对HepG-2的抗增殖作用。将H22瘤株接种于小鼠,制备移植性实体瘤模型,计算肿瘤抑制率、胸腺及脾脏指数;采用双抗体夹心ELISA法检测荷瘤小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平;测定白细胞数。分别用琼脂糖凝胶电泳法、western blot检测了荷瘤小鼠H22肿瘤组织的凋亡及Bax、Bcl-2的蛋白的表达情况。结果:19-羟基乌苏酯对HepG-2有明显的体外抗增殖作用,当浓度为6.25μg/mL作用时间24h时,抑制率为46.2%,接近IC50;药物处理后发现细胞体积变小,细胞核深染:25.00、12.50、6.25和3.13μg/mL的19-羟基乌苏酯对HepG-2作用24h的LDH比活性分别为1576.89、1561.61、1884.406和1411.12U/gprot; DNA Ladder法可观测到明显的凋亡条带;流式细胞术测定12.50、6.25和3.13μg/mL的19-羟基乌苏酯对HepG-2作用24h的早期凋亡率分别为10.20%、10.85%和32.89%;19-羟基乌苏酯的含药血清对HepG-2细胞也有体外抗增殖作用。Western blot法检测19-羟基乌苏酯可以上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达。不同剂量的薰衣草乙醇提取物的抑瘤率均高于21%,显著提高胸腺指数,提高血清中TNF-α和IL-6的水平,降低实体瘤组织VEGF的水平;薰衣草乙醇提取物用药组的白细胞数与正常组比较无明显差异,显著高于阳性对照组。DNA Ladder法可观测到H22肿瘤组织明显的凋亡条带;薰衣草乙醇提取物可以上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达。结论:薰衣草乙酸乙酯提取物对HepG-2有明显的体外抗增殖作用,乙醇提取物对H22荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用。其机制可能是通过调节免疫功能、抑制肿瘤组织血管生成、促进细胞坏死、诱导凋亡而发挥抗肿瘤作用。
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