【摘 要】
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金黄色葡萄球菌不仅危害人类健康,而且给畜牧业造成严重经济损失。研究表明,S.aureus TRAP(Target of RNAIII Activating Protein)是金黄色葡萄球菌膜相联蛋白具有抗氧化应激作用,在预防金黄色葡萄球菌感染中能诱导机体产生良好的免疫保护作用。Als3是白色念珠菌的粘附因子,能诱导良好细胞免疫应答和抗金黄色葡萄球菌交叉免疫保护。为增强TRAP诱导的细胞免疫应答,将
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金黄色葡萄球菌不仅危害人类健康,而且给畜牧业造成严重经济损失。研究表明,S.aureus TRAP(Target of RNAIII Activating Protein)是金黄色葡萄球菌膜相联蛋白具有抗氧化应激作用,在预防金黄色葡萄球菌感染中能诱导机体产生良好的免疫保护作用。Als3是白色念珠菌的粘附因子,能诱导良好细胞免疫应答和抗金黄色葡萄球菌交叉免疫保护。为增强TRAP诱导的细胞免疫应答,将TRAP与Als3 T细胞表位融合并与不同佐剂配伍免疫小鼠,检测TRAP诱导的抗体和细胞因子水平以及免疫保护作用。首先用柔性linker将Als3 T细胞表位连接到TRAP的N端,获得融合蛋白命名为ATT。与弗氏完全佐剂乳化后于小鼠后腿部肌肉接种,3周后用弗氏不完全佐剂乳化抗原加强免疫,同时用TRAP、6次重复的Als3 T细胞表位(命名为e Als)、TRAP+e Als及PBS作为对照。加强免疫后14天,检测小鼠脾淋巴细胞分泌的抗原特异性细胞因子水平和血清抗体水平及抗体亚类,并用金黄色葡萄球菌Newman株和Wood46株攻毒。结果,ATT组和TRAP+Als3组的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A水平及抗体浓度高于其他组,差异显著,攻毒后ATT组小鼠存活率明显高于其他各组。表明ATT诱导的免疫保护作用明显优于TRAP和TRAP+Als3,Als3显著增强了TRAP免疫应答和免疫保护作用。进一步将ATT分别与佐剂FIA、CpG、MDP、CpG+MDP、CpG+FIA、MDP+FIA和CpG+MDP+FIA配制成疫苗,按上述方法免疫接种小鼠,加强免疫后7天检测脾淋巴细胞分泌的特异性细胞因子水平、血清抗体水平及抗体亚类,并用金黄色葡萄球菌Newman株和Wood46株攻毒。结果,ATT+CpG+MDP+FIA组的IFN-γ和IL-17A水平最高,与其他各佐剂组相比差异极显著(p<0.01),抗体水平和IgG1高于其他各佐剂组;攻毒后14天,ATT+CpG+MDP+FIA免疫组存活率均高于其他各组。表明ATT与CpG+MDP+FIA佐剂诱导的免疫应答和免疫保护作用明显优于其他佐剂组。该研究为进一步研制金黄色葡萄球菌新型高效疫苗提供了参考。
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