酮咯酸术后镇痛对大鼠IL-6与IL-10的影响

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目的:由于细胞因子在术后免疫调节以及多种免疫相关性疾病的发生、发展、转归中都起着重要作用,本文通过建立术后镇痛大鼠模型,选取促炎细胞因子IL-6和抗炎细胞因子IL-10进行术后不同时相的血清学观察,并检测这两个因子在脾脏免疫器官中的术后对应时相的动态表达,以探讨术后镇痛对机体免疫功能的影响,为临床提供理论依据和实验基础。方法:选择成年Wistar大鼠75只,雌雄不限,随机分为对照组(D),手术模型组(S),酮咯酸氨丁三醇注射液处理组(T),每组25只大鼠。每组再分为3、6、12、24、48小时5个亚组,每亚组5只。D组大鼠只做2%戊巴比妥钠麻醉处理:S组大鼠在2%戊巴比妥钠麻醉后剃光它们背部的毛,在背中线做一4厘米长切口,深及胸椎。然后用生理盐水冲洗伤口和5-0尼龙线缝合;T组在同S组处理后30分钟给予酮咯酸氨丁三醇注射液(尼松)5毫克/公斤肌肉注射,每6小时一次,共24小时。术后大鼠均可随意获取大鼠饲料和水。D组、S组和T组动物术后3、6、12、24、48小时5个时间点2%戊巴比妥钠麻醉后处死,抽取门静脉血标本各1m1室温放置15分钟,先以3000r/min转速离心10min,再以5000r/min转速离心10min,取血清,-20℃保存。无菌取脾脏组织放入已高压灭菌的组织冻存管中,立即置于液氮中保存。采用实时荧光定量PCR分析大鼠脾脏组织中IL-6mRNA和IL-10mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6、IL-10中的含量。结果:(1)对照组血清IL-6、IL-10水平以及脾脏组织中IL-6mRNA和IL-10mRNA的表达在48h内无显著变化。(2)在血清及组织中,S组和T组的IL-6均是术后3h开始升高,24h达高峰,其在48h后,IL-6浓度有明显回落,但仍高于正常(P<0.05)。其中S组血清IL-6在12h、24h两个时相与对照组比较升高非常显著(P<0.01),与T组也有统计差异(P<0.05)。(3)在血清及组织中,S组和T组的IL-10也是在术后3h开始升高,12h达到高峰,24h明显下降。S组血清IL-10在6h升高明显(P<0.05),12h、24h与对照组比较显著差异(P<0.01),而S组和T组之间只有在12h有统计学差异(P<0.05)。(4)T组的IL-6或IL-10无论在血清还是组织中均低于相应时相的S组。结论:(1)术后非镇痛大鼠存在促炎性细胞因子IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的“高水平平衡”状态。(2)经酮咯酸术后镇痛的大鼠,血清和脾脏组织中IL-6、IL-10浓度均降低,提示酮咯酸可能具有下调术后大鼠促、抗炎细胞因子的“高水平平衡”功能。(3)术后镇痛大鼠在血清与脾脏组织中IL-6和IL-10细胞因子水平保持一致。说明血清中IL-6和IL-10细胞因子水平变化基本能反映脾脏组织中IL-6mRNA和IL-10mRNA的表达情况,故可以作为术后镇痛大鼠早期免疫功能的检测指标。
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