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第一部分Abp1过表达对足细胞损伤效应的机制研究目的:探究Abp1过表达对足细胞的损伤效应及其机制。方法:第一节:各选取6例患者病理改变为微小病变肾病（MCNS）和局灶节段性肾小球硬化（FSGS）肾活检组织,同期匹配肾母细胞瘤癌旁部位正常肾组织,免疫组化法检测Abp1的表达水平。同时,选取临床信息系统20例患者（10例MCNS和10例FSGS）进行起病初期尿蛋白定量、血肌酐和血尿素氮横断面分析。第二节:采用6周龄SPF级雄性BALB/c野生型（WT）和Abp1基因全敲除（Abp1KO）小鼠建立阿霉素肾病小鼠模型（ADR）,造模12周后对肾组织进行HE和PAS染色、双肾指数评估、肾小球面积计算、肾小球PAS阳性染色面积评估、对血清白蛋白和尿素氮进行生化检测、电子显微镜透射观察肾脏超微结构,从而分析阿霉素造模12周后肾脏损害情况。此外,采用随机尿蛋白肌酐比值测定阿霉素造模后0周、4周、8周、12周蛋白尿变化情况。第三节:利用Abp1慢病毒转染MPC5足细胞系,构建稳定的Abp1过表达足细胞系（OEAbp1）、Abp1敲低足细胞系（Sh Abp1）及阴性对照组,分别检测OEAbp1和Sh Abp1的足细胞标记分子、细胞超微结构、F-actin表达、足细胞黏附功能、迁移功能等指标。第四节:利用转录组测序（RNA-seq）比较OEAbp1和阴性对照组足细胞,然后进行GO和KEGG富集分析,然后采用Cytoscape 3.5.1获得蛋白互作网络（PPI）,分别使用Cyto NCA和MCODE插件获取PPI网络核心基因,最后采用RT-q PCR检测验证RNA-seq数据。结果:第一节:Abp1在PNS患者的肾小球表达显著升高（P<0.05）,与对照组相比,MCNS和FSGS组病初尿蛋白定量水平显著增高（P<0.01）;FSGS组与对照组相比,病初血尿素氮水平有增高（P<0.05）。第二节:阿霉素造模后第12周,与野生型小鼠比较,Abp1敲除鼠在毛色光泽、进食状态,活动量,精神状况、体重增长等方面有部分缓解,同时Abp1敲除肾脏组织炎症细胞浸润有缓解,系膜细胞轻度增生,未观察到FSGS形成。注射阿霉素的野生小鼠肾脏指数明显升高（P<0.01）,病理染色显示肾小球显著缩小（P<0.01）、系膜区增生明显（P<0.01）。注射阿霉素的Abp1敲除鼠血尿素氮水平与对照组比较无显著差异（P>0.05）。注射阿霉素的野生型组、小鼠血清白蛋白水平显著下降（P<0.01）,而Abp1敲除鼠组无显著变化。注射阿霉素的野生型小鼠出现了典型的蛋白尿改变,而同期注射阿霉素的Abp1敲除鼠尿蛋白/肌酐比值仅在第12周有差异性升高,其上升速度慢于同期注射阿霉素的野生鼠（P<0.05）。透射电子显微镜显示,和野生型小鼠相比,造模12周后Abp1敲除鼠肾小球超微结构有部分缓解。第三节:RT-q PCR显示OEAbp1的标记分子synaptopodin、nephrin的m RNA水平显著下降（P<0.01）,而Sh Abp1无显著变化（P>0.05）;扫描电子显微镜发现OEAbp1足细胞胞体纤细、足突形态不完整、足细胞间足突交联减少,而Sh Abp1形态无明显改变。荧光显微镜显示OEAbp1足细胞F-actin表达下降,有骨架聚合现象,同期Sh Abp1形态无明显改变（P>0.05）。与此同时,OEAbp1足细胞黏附功能、迁移功能和阴性对照组相比显著下降（P<0.01）;Sh Abp1足细胞与阴性对照组相比,足细胞黏附功能无明显差异（P>0.05）。第四节:分析RNA-seq表达谱获得1130个差异性表达基因（DEGs）,包括483个上调的DEGs和647个下调的DEGs。基于DEGs的GO及KEGG分析提示上调和下调的富集信号有很大差异。利用Cytoscape 3.5.1获得的PPI网络包括366个节点和1668个连线,同时取得三个重要的枢纽基因作用模块,排前15位的核心蛋白依次是泛素A-52残基核糖体蛋白融合产物1（UBA52）、激肽原1（KNG1）、核糖体蛋白S25（RPS25）、核糖体蛋白S15a（RPS15A）、核糖体蛋白S3A（RPS3A1）、核糖体蛋白S13（RPS13）、纤维蛋白原γ链（FGG）、补体C3（C3）、FAU泛素样蛋白与核糖体蛋白S30融合（FAU）、纤维蛋白原α链（FGA）、Serpin家族成员1（SERPINA1A）、纤维连接蛋白1（FN1）、核糖体蛋白L30（RPL30）、白蛋白（ALB）、α-2-HS-糖蛋白（AHSG）。RT-q PCR检测验证RNA-seq数据提示数据具有可靠性。结论:Abp1在PNS患者肾脏组织（MCNS和FSGS）高度表达,参与了PNS肾脏损害的发生、发展。Abp1过表达可以介导足细胞产生广泛的损伤效应,包括足细胞形态异常、骨架F-actin结构及数量改变、细胞黏附、迁移功能障碍等,Abp1敲除可有效缓解阿霉素诱导的肾脏损害。Abp1有望成为PNS治疗的潜在的靶点,Abp1过表达介导的核心蛋白互作模块为PNS今后的研究提供了方向。第二部分儿童激素敏感无复发型肾病综合征全基因组关联性分析目的:使用全基因组关联分析（GWAS）研究儿童激素敏感无复发型肾病综合征患者（SSNSWR）特有的易感基因及位点,揭示激素敏感无复发型肾病综合征的分子遗传学原理。方法:采用全外显子探针对1983例中国汉族人（148例SSNSWR和1835例对照）进行目标基因组区域捕获,原始数据质控合格后采用GWAS方法进行关联分析。结果:连锁不平衡回归分析（LDSC）证实选取病例和健康对照匹配合理。对目标基因区域的捕获、分型和GWAS统计分析后,有4个SNP达显著性水平（P<5×10-6）,为位于2q31.1的gcw171713702、2q21.3的rs35093754、2q37.1的rs117962550、5p15.33的rs878863933,其分别关联的基因为基因谷氨酸脱羧酶1（GAD1）、乳糖酶（LCT）、碱性磷酸酶-生殖细胞（ALPG）、琥珀酸脱氢酶复合物黄素蛋白亚基A假基因3（SDHAP3）。相似条件分析显示gcw171713702 C/T、rs117962550 C/A、rs878863933 T/C为SSNSWR的独立易感位点。表达数量性状位点（e QTL）数据库尚无gcw171713702、rs117962550、rs878863933的报道。结论:本研究首次对激素敏感型肾病亚型的SSNSWR进行GWAS分析,发现GAD1、ALPG、SDHAP3等3个与SSNSWR相关的非HLA区域易感基因,丰富了现有原发性肾病综合征（PNS）的研究成果,提高了对PNS发病机制的认识。