【摘 要】
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目的:利用ox-LDL和LPS诱导RAW264.7巨噬细胞造成炎症模型,观察小檗碱对于炎症情况下巨噬细胞炎症因子分泌以及巨噬细胞极化的调控作用与PPAR-γ/HO-1通路的关系,为小檗碱抗动脉粥样硬化提供依据。方法:1.采用ox-LDL和LPS共同诱导RAW264.7巨噬细胞成为泡沫细胞,实验共分为7组:对照组、模型组（ox-LDL+LPS）、小檗碱组（ox-LDL+LPS+小檗碱）、小檗碱+GW
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目的:利用ox-LDL和LPS诱导RAW264.7巨噬细胞造成炎症模型,观察小檗碱对于炎症情况下巨噬细胞炎症因子分泌以及巨噬细胞极化的调控作用与PPAR-γ/HO-1通路的关系,为小檗碱抗动脉粥样硬化提供依据。方法:1.采用ox-LDL和LPS共同诱导RAW264.7巨噬细胞成为泡沫细胞,实验共分为7组:对照组、模型组（ox-LDL+LPS）、小檗碱组（ox-LDL+LPS+小檗碱）、小檗碱+GW9662组（ox-LDL+LPS+小檗碱+PPAR-γ抑制剂）、小檗碱+ZNPP组（ox-LDL+LPS+小檗碱+HO-1抑制剂）、GW9662组（ox-LDL+LPS+PPAR-γ抑制剂）、ZNPP组（ox-LDL+LPS+HO-1抑制剂）。2.采用CCK8法检测不同浓度小檗碱10、20、40、80、160umol/L对RAW264.7巨噬细胞活性的影响。3.采用ELISA法检测细胞因子i NOS、IL-6、IL-10、Arg-1、IL-4的表达水平。4.采用流式细胞术检测巨噬细胞极化表型CD80、CD163的表达。5.运用Western blotting检测PPAR-γ通路及HO-1基因蛋白的表达。结果:1.小檗碱干预24小时后,10 umol/L与20 umol/L细胞活性均高于40、80、160umol/L浓度组,差异具有统计学意义,最后选用20 umol/L作为后续实验使用小檗碱终浓度。2.经ox-LDL和LPS干预24小时后,模型组细胞与对照组细胞相比,模型组产生的i NOS浓度以及IL-6浓度明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,提示炎症模型造模成功;同时通过流式细胞术得到模型组细胞对比对照组细胞M1型细胞数量明显上升,差异具有统计学意义（P＜0.05）,也可证明造模成功。3.与模型组相比,小檗碱组、小檗碱+ZNPP、小檗碱+GW9662产生的i NOS、IL-6明显下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与小檗碱组相比,小檗碱+GW9662组、小檗碱+ZNPP组分泌i NOS、IL-6较小檗碱组增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。这提示小檗碱可以使模型组的炎症因子分泌减少,此作用可以被PPAR-γ或HO-1的抑制剂阻断。4.与模型组相比,小檗碱组、小檗碱+GW9662、小檗碱+ZNPP组的Arg-1、IL-4、IL-10明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与小檗碱组相比,小檗碱+GW9662、小檗碱+ZNPP组的Arg-1、IL-4、IL-10相比小檗碱组有减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）;其中小檗碱+GW9662组的IL-10与小檗碱组相比差异无统计学意义（P=0.51）。5.流式细胞术选用CD80阳性的细胞表示M1型细胞,CD163阳性的细胞表示M2型细胞,M2/M1型细胞比值表示巨噬细胞极化情况,其中小檗碱组M2/M1型细胞比值明显高于模型组细胞,差距具有统计学意义（P＜0.05）;小檗碱组与小檗碱+ZNPP组、小檗碱+GW9662组M2/M1相比比值较高,其中差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.蛋白印迹法显示:小檗碱组、小檗碱+GW9662组、小檗碱+ZNPP组的PPAR-γ的蛋白表达与模型组相比明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;小檗碱组与小檗碱+GW9662组、小檗碱+ZNPP组的HO-1蛋白表达量比模型组明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;其中小檗碱组的PPAR-γ、HO-1蛋白表达均高于小檗碱+GW9662、小檗碱+ZNPP组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:小檗碱可通过PPAR-γ/HO-1通路调控巨噬细胞极化,使巨噬细胞由M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,起到抗炎抗氧化的作用,为小檗碱对抗动脉粥样硬化作用提供依据。
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