IgA是人体一种重要的Ig类型，研究开发高效特异性检测和纯化IgA的试剂在广大医学领域中具有非常重要的应用价值。定向分子进化技术是探索研究生物大分子结构与功能的重要手段，同时也是改造、优化生物大分子特性的有效方法。DNA重排和噬菌体展示及筛选是体外定向分子进化的重要核心技术。本研究应用定向分子进化技术，将特异性结合IgA的IgA亲和体分子随机组合，构建噬菌体展示文库，以体外分子进化的方法筛选出高结合活性的具有重复结构的新型IgA亲和体分子，通过比较IgA亲和体单结构分子与重复结构分子的IgA结合活性的差异，研究IgA亲和体结构与功能的关系，与Ig相互作用的机制及体外重组进化的规律，为进一步应用分子进化手段改造功能蛋白积累经验。本研究分为四个部分： 一、IgA亲和体分子的基因合成 根据文献提供的IgA亲和体的氨基酸序列，选择2个有代表性的IgA亲和体序列A1、A2，设计引物，以基因合成的方法制备得到两个IgA亲和体片段，克隆于pMD-18T载体。经过序列分析并与文献所提供的序列进行比对，证明基因合成的IgA亲和体序列与文献中序列完全一致。 二、IgA亲和体随机组合噬菌体展示文库的构建 在IgA亲和体A1、A2片段两端引入Kpn Ⅰ酶切位点，3′端引入3个随机连接肽，经DNA重排，随机组合形成各种不同长度的片段，插入噬菌粒载体pCANTAB5S的Kpn Ⅰ克隆位点上，展示在噬菌体表面，构建噬菌体展示随机组合文库。文库的库容量为3.4×10⁷，滴度为1.6×10¹²TU／ml；原代组合文库中含79％以上的阳性克隆，其中由2个以上亲和体组成的阳性克隆占18％；DNA序列分析显示原代组合文库由A1、A2序列随机组合而成，各亲和体分子之间随机连接肽的核苷酸序列也呈随机分布。从文库的库容量、多样性和随机性各方面来看，该文库可满足体外分子进化研究的要求。 三、IgA亲和体随机组合噬菌体展示文库的分子进化 以人IgA分子为诱饵对IgA亲和体随机组合文库进行4轮亲和筛选，在人IgA分子导向的进化过程中，IgA亲和体随机组合文库的展示序列由1个结构分子和2