红掌组培苗优质高效繁殖技术的研究

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红掌(Anthurium andraeaum)为天南星科花烛属多年生常绿草本植物,花叶优美、典雅,花型独特,花期长,全年开花,且花色较多,经济效益较高,市场规模巨大。因传统的繁殖方式无法满足市场需求,植物组织培养技术已被广泛用于红掌种苗的大量生产。红掌再生体系已基本建立,但仍存在再生系统建立缓慢、出苗品质不佳的问题,为建立红掌组培苗优质、高效的繁殖技术,本文以4种红掌盆栽新品种为研究对象,对红掌腋芽培养、组培苗继代增殖与壮苗、生根条件及红掌组培过程中的体细胞无性系变异进行了系统的分析,取得如下主要实验结果:1.红掌腋芽初代培养结果表明,应用单一的灭菌方法难以彻底灭菌,用0.1%HgCl2灭菌10min,接种在正常培养基污染率在91.84%左右,酸化培养基之后,污染率在35.26%到45.38%之间;培养基中添加抗生素L-A100mg·L-1-400mg·L-1的污染率基本能控制在22.00%-24.80%,抗生素L-B随着浓度的增加,污染率从45.00%逐步下降到17.74%。其次,6-BA比ZT更适合腋芽的分化,IBA比NAA效果好,在1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1培养基上,大多腋芽以直接器官发生途径分化不定芽。第三,以红掌萌蘖腋芽为外植体的分化效果优于上部腋芽、茎段腋芽,15d腋芽开始分化,30d形成再生植株,大大提高了再生体系建立的效率。2.在红掌继代增殖过程中,光源对组培苗品种SYN01-L生长发育有重要的影响,结果表明传统的荧光灯培养下的组培苗不如LED光源的健壮,在不同红蓝光的LED光源中灯管V1最优,平均每株叶片数达4.7片,苗高2.8cm,愈伤组织量最多达1.16cm,分化数达1.53个,鲜重达到最大为1043.9mg,叶绿素含量最高。3.在组培苗单芽品种为SYN03-D的继代增殖与壮苗过程中,结果表明,继代事可选择先进行增殖培养后进行壮苗培养的途径,在3种生长素中,IBA促进增殖的效果要优于NAA、2,4-D,细胞分裂素ZT2.0mg·L-1及6-BA2.0mg·L-1与生长素IBA组合的激素条件,对红掌组培苗的增殖分化效果较为理想,继代培养30d,繁殖系数分别可达4.69、4.43个。其次,减少细胞分裂素的使用可以提高壮苗的效果,当细胞分裂素ZT减少到0.5mg·L-1,同时添加生长素IBA0.1mg·L-1,壮苗指数显著增大,从0.484上升到1.189。第三,继代过程中可选择先继代增殖培养后壮苗培养。4.红掌组培苗生根的单因素试验中显示,IBA的生根效果比NAA好;选用NAA、IBA、活性炭及蔗糖4个因素,利用正交实验优化了红掌组培苗的生根途径,结果表明,培养基NAA0.2mg·L-1、IBA0.5mg·L-1、活性炭0.5g·L-1、蔗糖30g·L-1是最优组合。5.对红掌体细胞无性系变异的调查结果表明,随着继代次数的增加,组培苗发生无性系变异率从第8代的0.042%增加至第10代的0.076%;随着初代激素浓度的增强,体细胞无性系变异也随之增加,不同品种变异株系在形态上有所区别,部分性状可稳定遗传;第三,细胞分裂素特别是高浓度细胞分裂素会增加致畸率,使得愈伤组织分化出异常不定芽的数量大幅上升。
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