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背景:茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf.为多孔菌科卧菌属真菌的干燥菌核,是一种常用中药,始载于《神农本草经》,味甘、淡,性平;归心、肺、脾、肾经;主要功能为利水渗湿,健脾,宁心。茯苓中主要发挥药理学作用的成分是三萜类和多糖类化合物,此外还含有其他成分如甾体类、氨基酸、挥发油、胆碱、组氨酸及钾盐等微量元素。“脾为后天之本”表明“脾”在中医藏象学说中的重要地位,而脾运化失常常表现为脾虚。脾气虚证是指气虚脾失健运,以食少、腹胀、大便溏薄、神疲、肢体倦怠、舌淡脉弱等为常见症的证候。西医认为,脾是人体免疫器官,主要起到调节免疫的作用,而中医认为,脾与人体消化系统、神经系统、免疫系统等多个系统都相关。目前,对茯苓传统功效及其发挥药效作用的作用机制不明确,本研究在中医药理论指导下,基于茯苓健脾功效,诠释其发挥作用的物质基础及作用机制。目的:本文旨在通过运用饮食不节和劳累过度的复合因素造模法建立大鼠脾虚模型,明确茯苓不同提取部位治疗脾虚的药效及初步探究其作用机制,为诠释其发挥作用的物质基础及作用机制提供科学依据。方法:采用饮食失节合并劳累过度法构建脾虚大鼠模型,模型组每隔一天喂食一次,大鼠每天游泳至力竭,大鼠口鼻没入水中,四肢及尾巴摆动缓慢,口鼻一次性冒泡5个为止,正常组正常喂食,不游泳,连续6周。造模完成后分组,阳性药组(Buzhong Yiqi Pill,BZYQP)每日灌胃补中益气丸水溶液(生药量4.5 g/kg),水煎液组(Poria cocos decoction,PCD)每日灌胃茯苓水煎液(生药量7.5 g/kg),总三萜组(Poria cocos triterpenoids,PCT)、水溶性多糖组(Poria cocos water-soluble polysaccharides,PCWP)和酸性多糖组(Poria cocos alkali-soluble polysaccharides,PCAP)每日灌胃茯苓总三萜(生药量7.5g/kg)、水溶性多糖(生药量7.5 g/kg)和酸性多糖(生药量7.5 g/kg),茯苓粉组(Poria cocos power,PCPO)每日灌胃茯苓粉溶液(生药量1.0g/kg),正常组(Control)和模型组(Model)均灌胃等量生理盐水,灌胃2周。实验期满,以10 mL/kg灌胃3%的D-木糖溶液,之后取出所有大鼠的血清、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、小肠和胸腺,计算脏器系数。生化试剂盒检测大鼠血清中D-木糖(D-xylose)、ALB、TP、ACH的含量;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清中GAS、MTL、VIP、EGF、TGF-β1、IL-17、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-1β、IL-6、TNF-α和胃组织中5-HT、SP、CGRP、CCKAR的含量;苏木精-伊红(H&E)染色用来判断胃和小肠的病理生理结构变化;免疫组化染色检测胃组织中Ghrelin和EGFR、小肠组织中MUC2、肾脏组织中AQP1和AQP2的表达;Western blot检测大鼠脾脏中T-bet、GATA3、ROR-γt和Foxp3的表达。结果:造模期间,从第6天开始,出现游泳耐力下降,毛发无光泽,出现掉毛现象,大便时干时软。从第8天开始,饮食量减少,体重明显低于空白组,并出现倦怠乏力、抱团眯眼、大便溏稀等现象;给药期间,从第3天开始,阳性药组、水煎液组、总三萜组出现游泳时间上升,掉毛现象减少,大便时干时软,体重增长加快。从第7天开始,各组大鼠体重均明显高于模型组,游泳时间上升,毛发变得光泽,精神状态有所改善,到第12天,给药组大便基本正常成型。生化试剂盒结果显示,与Control相比,Model组大鼠血清D-xylose、ACH、ALB、TP的含量显著下降(p<0.01),与Model组相比,PCT组血清D-xylose、ACH、TP的含量显著上升(p<0.05),PCWP组血清D-xylose、ACH的含量显著上升(p<0.05),PCD组、PCAP组和PCPO组血清D-xylose、ACH、ALB、TP的含量均显著上升(p<0.01或p<0.05);ELISA结果显示,与Control相比,Model组大鼠GAS、MTL、SP、IL-2、IL-4、TGF-β1含量显著降低(p<0.01或p<0.05),VIP、CCKAR、5-HT、CGRP、EGF、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α含量显著升高(p<0.01或p<0.05),与Model相比,PCD组大鼠GAS、MTL、SP、EGF、IL-2、IL-4含量显著升高(p<0.01或p<0.05),VIP、CCKAR、5-HT、CGRP、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α含量显著降低(p<0.01或p<0.05),PCT组大鼠GAS、SP、EGF、IL-4含量显著升高(p<0.01或p<0.05),CCKAR、5-HT、CGRP、IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α含量显著降低(p<0.01或p<0.05),PCWP组大鼠GAS、SP、EGF、IL-2、IL-4、TGF-β1含量显著升高(p<0.01或p<0.05),VIP、CCKAR、5-HT、CGRP、IFN-γ、IL-1β、IL-17、TNF-α含量显著降低(p<0.01或p<0.05),PCAP组大鼠EGF、IL-4、TGF-β1含量显著升高(p<0.01或p<0.05),5-HT、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α含量显著降低(p<0.01或p<0.05),PCPO组大鼠GAS、EGF、IL-2、IL-4、TGF-β1含量显著升高(p<0.01或p<0.05),VIP、5-HT、IL-1β、IL-6、IL-17含量显著降低(p<0.01或p<0.05);H&E结果显示,Control组胃组织形态正常,未见明显病理变化,小肠粘膜上皮结构完整,上皮细胞无脱落,而Model组胃粘膜上皮细胞大量坏死,组织形态被破坏,小肠绒毛结构不完整,粘膜上皮细胞可见明显脱落,给药治疗后,各给药组均能改善脾虚大鼠的胃组织病变,茯苓总三萜和茯苓酸性多糖对小肠黏膜有明显改善效果;免疫组化染色结果显示,与Control组比较,Model组Ghrelin、EGFR、MUC2表达有所降低,AQP1、AQP2表达有所升高,和Model组相比,PCD组Ghrelin、EGFR、MUC2含量有所升高,AQP1、AQP2表达有所降低,PCT组Ghrelin、EGFR、MUC2含量有所升高,AQP1、AQP2表达有所降低,PCWP组MUC2含量有所升高,AQP1表达有所降低,PCAP组Ghrelin、EGFR、MUC2含量有所升高,AQP2表达有所降低,PCPO组Ghrelin、MUC2含量有所升高,AQP1、AQP2表达有所降低;Western blot结果显示,与Control组相比,Model组大鼠脾脏的T-bet和ROR-γt表达显著升高(p<0.01),GATA3和Foxp3表达显著降低(p<0.01),与Model组相比,PCD组T-bet表达显著降低(p<0.05),GATA3表达显著升高(p<0.01),PCT组ROR-γt表达显著降低(p<0.01),GATA3和Foxp3表达显著升高(p<0.01或p<0.05),PCWP组和PCAP组T-bet和ROR-γt表达显著降低(p<0.01),GATA3和Foxp3表达显著升高(p<0.01),PCPO组ROR-γt表达显著降低(p<0.01),GATA3和Foxp3表达显著升高(p<0.01)。结论:茯苓的不同提取部位对脾虚均有良好的治疗效果,但它们的作用机制不尽相同。茯苓总三萜、茯苓水溶性多糖、茯苓酸性多糖均可以通过调节血清EGF、小肠MUC2的含量来保护胃肠黏膜,降低肾AQP1或AQP2的含量来改善水液代谢障碍,以及调节Th17/Treg细胞的失衡来增强免疫力。其中,茯苓总三萜和茯苓酸性多糖能通过调节胃EGFR的含量来促进胃黏膜修复,茯苓总三萜和茯苓水溶性多糖还能通过调节脑肠肽来改善胃肠功能,茯苓水溶性多糖和茯苓酸性多糖还能通过调节Th1/Th2细胞的失衡来增强免疫力。