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猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的B类动物疫病。近年来TGE在各地养猪场的暴发对养猪业的发展造成了巨大阻力。当前,随着人类新型冠状病毒（2019-n Co V）在全球范围内的传播,人类生命安全受到严重威胁。为了有效抵御冠状病毒对人和动物的侵袭,越来越多的研究人员开始寻求解决方案。近年来,干扰素（Interferon,IFN）因其介导的抗病毒作用在机体的天然免疫过程中极其重要而成为研究热点,其中干扰素刺激基因（Interferon stimulation genes,ISGs）在干扰素抗病毒信号通路中起着重要作用。近年来已经有越来越多的ISGs被发现,其中包括干扰素刺激基因15（Interferon stimulation gene 15,ISG15）、2’-5’-寡聚腺普酸合成酶（2’-5’-oligoadenylate synthetase,2’-5’-OAS）、粘病毒抗性基因A（Myxovirus resistance protein A,Mx A）、粘病毒抗性基因B（Myxovirus resistance protein B,Mx B）、干扰素刺激基因44（Interferon stimulation gene 44,IFI44）及干扰素刺激基因44样（Interferon stimulation gene 44 like,IFI44L）。研究表明,不同ISGs对病毒增殖的调控作用及其机制存在一定的差异。由于IFI44L是新鉴定的ISG,国内外对IFI44L的抗病毒作用及机制研究甚少。因此,研究IFI44L对病毒增殖的调控作用及其机制有着重要意义。鉴于此,本研究首次对猪源IFI44L进行了基因克隆和生物信息学分析。在此基础上,利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和TCID50等研究方法探究过表达和敲低IFI44L对TGEV增殖的影响。最后,制备了针对猪IFI44L蛋白的鼠源多克隆抗体（Polyclonal antibody,Pc Ab）,并通过蛋白免疫印迹（Western-blot）和间接免疫荧光（IFA）实验证明该多克隆抗体的特异性与稳定性。这为进一步研究IFI44L蛋白的结构和生物学功能奠定基础,并为TGE等冠状病毒病的防控提供新的思路和手段。本研究得到如下结果:1.猪IFI44L基因的扩增、序列分析及进化树绘制根据人IFI44L基因序列分析的结果,预测猪的IFI44L基因序列,并以此设计引物。以猪肾细胞（PK-15）总c DNA为模板进行扩增,获得猪IFI44L基因序列。经测序分析,该基因编码区全长为1320bp,编码439个氨基酸。利用Clustal Omega软件,将猪IFI44L与Gen Bank中发表的人源、鼠源IFI44L编码区进行了同源性对比。发现猪IFI44L与人和鼠的氨基酸序列同源性分别为63.01%和48.97%。利用MEGAX64软件,将猪IFI44L与Gen Bank中发表的不同物种IFI44L编码区一同绘制系统发育树。结果表明猪IFI44L与牛IFI44L的亲缘关系最近。2.猪IFI44L对猪传染性胃肠炎病毒增殖的影响首先以pCAGGS-HA为载体构建了真核表达重组质粒p CAGGS-HA-44L。经Western-blot检测证实p CAGGS-HA-44L在PK-15细胞具有高表达水平后,将其转染于PK-15细胞,24h后接种不同感染复数的TGEV病毒液,并于病毒感染24h后收集样品,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和TCID50检测。结果显示,过表达组TGEV N基因的m RNA水平和病毒滴度均显著低于对照组,表明IFI44L的过表达抑制了TGEV的增殖。为了进一步证实IFI44L对病毒复制的影响,我们设计了针对猪IFI44L的三条si RNA（分别命名为si IFI44L-137、si IFI44L-419和si IFI44L-1172）,通过SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测后甄选出si IFI44L-137干扰效果最佳。随后,将si IFI44L-137转染PK-15细胞,病毒感染24h后收集样品进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和TCID50检测。结果显示,敲低IFI44L可促进TGEV的增殖。以上结果表明,猪IFI44L对TGEV的增殖具有显著的抑制作用。3.鼠源抗猪IFI44L蛋白多克隆抗体的制备首先,以p ET-28a（+）为载体构建原核表达重组质粒p ET-28a-44L。将重组质粒进行诱导表达及蛋白纯化,并以纯化的蛋白作为抗原分4次免疫BALB/C小鼠,每次间隔两周,第四次免疫一周后,制备抗猪IFI44L蛋白的鼠源多克隆抗体（Pc Ab）。间接ELISA检测显示,制备的鼠源Pc Ab血清抗体效价为1:3 200;Western blot检测结果表明,制备的Pc Ab能特异性识别原核表达和PK-15猪细胞的IFI44L蛋白;进一步运用该Pc Ab进行间接免疫荧光（IFA）实验,IFA检测显示Pc Ab能与PK-15细胞中的猪IFI44L进行反应;IFA结果显示猪IFI44L在细胞中广泛表达,且主要存在于细胞核。以上结果表明制备的鼠源抗猪IFI44L蛋白Pc Ab具有良好的特异性。