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目的:阻塞性睡眠呼吸暂停患者常伴有不同程度的认知功能障碍,造成这种现象的原因与间歇低氧所致神经细胞的不可逆损伤有关,而低氧刺激下内皮细胞活化损伤后释放的内皮微粒介导的自噬激活可能参与了神经细胞的损伤,但其具体机制尚不清楚。近年来间歇低氧所致自噬激活已成为研究神经细胞损伤的热点问题。过度的自噬激活在神经细胞凋亡损伤中具有非常重要的意义。由此我们推测间歇低氧刺激下神经细胞的损伤是否与内皮细胞活化损伤后释放的内皮微粒介导的自噬激活相关呢?方法:1研究对象:小鼠脑微血管内皮细胞和嗜铬细胞瘤细胞。2模型建立与分组:应用终浓度为100ug/ml的间歇低氧处理后内皮细胞来源微粒处理PC12细胞24小时。3分组与基因沉默:分别沉默AKT和mTOR基因,设立正常对照组、IH处理组、siRNA组、IH+siRNA组,选择自噬水平变化最明显的内皮微粒终浓度100ug/ml作为处理条件。4需要检测的指标:通过流式细胞仪检测内皮微粒的数量和细胞内活性氧的含量;纳米粒子追踪分析检测内皮微粒的大小粒径;免疫印迹及免疫荧光染色技术分别检测LC3-II等自噬指标的表达;TUNEL法检测各实验组PC12细胞凋亡率;免疫组化技术检测间歇低氧暴露4周后小鼠脑组织中LC3II的表达情况;Western Blot技术检测各组PC12细胞信号通路相关蛋白AKT、mTOR的表达变化。结果:1间歇低氧影响内皮微粒的释放。间歇低氧处理后的内皮细胞释放微粒数量与对照组相比显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。2间歇低氧处理后的内皮微粒能够与神经细胞融合。免疫荧光显示PKH26染色后的内皮微粒出现在PC12细胞质内。3间歇低氧后产生的内皮微粒影响神经细胞自噬的表达,间歇低氧后产生的内皮微粒与PC12细胞共孵育后,免疫荧光显示LC3-II阳性点增加,免疫印迹证实自噬相关蛋白LC3-II、Becline-1的表达明显增加,P62的表达显著减少。流式细胞仪发现自噬水平显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示与正常对照组相比间歇低氧处理4周后,小鼠脑组织中自噬表达水平明显增多。TUNEL法证实间歇低氧后产生的内皮微粒处理后PC12细胞自噬水平的增多能够增加细胞的凋亡率,给与氯喹处理后,细胞凋亡水平明显降低。4间歇低氧处理后内皮微粒能够影响神经细胞内氧化应激水平。流式细胞仪和免疫荧光技术分别检测正常细胞和间歇低氧后产生的内皮微粒处理后PC12细胞中活性氧的表达水平,结果证实间歇低氧后产生的内皮微粒处理组细胞ROS的荧光百分比较正常组显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)间歇低氧处理后内皮微粒能够诱导神经细胞ROS释放并介导自噬激活。Western Blot结果显示,IH-EMV处理组和正常组相比LC3II/Becline-1表达增加,P62表达减少。IH-EMV+NAC组与IH-EMV组相比LC3II/Becline-1表达减少,P62表达增多,差异具有统计学意义。(6)间歇低氧后产生的内皮微粒通过AKT/mTOR通路介导神经细胞自噬激活。Western Blot结果显示,间歇低氧后产生的内皮微粒处理后,较正常组相比,PC12细胞中p-Akt和p-mTOR的表达受到抑制,LC3II表达水平显著增多,AKT基因沉默组和mTOR基因沉默组较正常组相比,LC3II的水平都显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究证实:1间歇低氧增加内皮细胞微粒的释放。2间歇低氧后产生的内皮微粒能够与神经细胞融合。3间歇低氧后产生的内皮微粒能够增加神经细胞自噬表达水平。(4)间歇低氧后产生的内皮微粒能够激活神经细胞内氧化应激水平。(5)间歇低氧后产生的内皮微粒能够诱导神经细胞ROS释放并介导自噬激活。(6)间歇低氧后产生的内皮微粒通过AKT/mTOR通路介导神经细胞自噬激活。综上所述,间歇低氧条件下内皮微粒诱导神经细胞ROS释放并通过AKT/mTOR介导自噬激活。